CAR-baeillus亚单位rRNA基因分子克隆及斑点杂交方法的建立

来源 :北京实验动物科学与管理 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xufuen2001
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用真细菌类亚单位rRNA中的保守片段序列合成引物,从小鼠来源的CAR-bacillusCBM株的基因组中用PCR方法扩增出其1.5Kb大小的基因片段,两端加尾dc和已加尾dG的PBR322质粒连接,转化入JM109菌中,在含有四环素的培养基中挑选克隆经氨苄青霉素筛选后,在LB基液中大量增殖,经溶菌酶裂解,提取重组质粒,经PSTI消化,得到1.5kb大小的插入菌段,经HindⅢ、HinfⅠ、ECORI(HaeⅢ)和xhoⅠ测定忠实性后,以此为模板,用非放射地高辛标记试剂盒合成探针,其灵敏性可达1.2pg,且特异性较强。
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