【摘 要】
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目的构建带绿色荧光蛋白(GFP)标签的丝氨酸-苏氨酸激酶1(LKB1)慢病毒过表达细胞株，观察其在哺乳动物细胞内的表达和定位以及相关功能影响。方法构建出慢病毒表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体(pCDH-LKB1)并筛选慢病毒细胞株。运用免疫荧光及Western blot检测其在哺乳动物细胞中的定位与表达。同时使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测LKB1对细胞活性的影响。结
【机 构】
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215006 苏州大学医学部,200030 上海交通大学附属第六人民医院肿瘤科,200030 上海交通大学附属第六人民医院肿瘤科,200030 上海交通大学附属第六人民医院肿瘤科
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目的构建带绿色荧光蛋白(GFP)标签的丝氨酸-苏氨酸激酶1(LKB1)慢病毒过表达细胞株，观察其在哺乳动物细胞内的表达和定位以及相关功能影响。
方法构建出慢病毒表达质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体(pCDH-LKB1)并筛选慢病毒细胞株。运用免疫荧光及Western blot检测其在哺乳动物细胞中的定位与表达。同时使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测LKB1对细胞活性的影响。
结果成功构建LKB1慢病毒细胞株，荧光定位实验表明LKB1在人成骨肉瘤细胞细胞的细胞质细胞核均有分布；Western blot法检测表明LKB1在真核细胞中能有效表达。CCK-8检测显示，转染48 h后，对照组1.131±0.003，LKB1组0.739±0.051，LKB1组相比于对照组，活性降低，两组差异有统计学意义(P＝0.001)。
结论成功构建过表达带绿色荧光蛋白标签的LKB1蛋白(GFP-LKB1)的细胞株，LKB1过表达明显抑制肿瘤细胞的活性。
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