【摘 要】
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目的：获得α-1,3-半乳糖基转移酶（GGTA1）基因敲除的五指山小型猪胎儿,为异种器官移植研究提供基础平台。方法：以新霉素磷酸转移酶基因（neo）为筛选标记基因构建启动子缺陷型打靶载体
【机 构】
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南方医科大学基因工程研究所,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,甘肃农业大学动物科学技术学院
【基金项目】
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中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（2010jc-7-4）, 国家重大专项（2008ZX08006-003）
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目的：获得α-1,3-半乳糖基转移酶（GGTA1）基因敲除的五指山小型猪胎儿,为异种器官移植研究提供基础平台。方法：以新霉素磷酸转移酶基因（neo）为筛选标记基因构建启动子缺陷型打靶载体,打靶载体线性化后用电转染法将其导入胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞经G418筛选后,用PCR法检测药物抗性的细胞克隆,对阳性细胞进行核移植构建重构胚胎及胚胎移植。结果：转染后,经筛选共得到176个具有G418抗性的细胞克隆,经PCR检测,其中2个细胞克隆发生了同源重组;以其中1个GGTA1＋/-细胞克隆为供体细胞进行核移植
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