评价M₃受体在盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高中的作用及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系。

将人肺微血管内皮细胞以1×10⁵个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中，采用随机数字表法分为6组(n＝5)：空白对照组(C组)、M₃受体shRNA转染组(shRNA组)、脂多糖组(LPS组)、盐酸戊乙奎醚＋脂多糖组(P＋LPS组)、脂多糖＋M₃受体shRNA转染组(LPS＋shRNA组)和盐酸戊乙奎醚＋脂多糖＋M₃受体shRNA转染组(P＋LPS＋shRNA组)。shRNA组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组以含2.5 nmol/L M₃受体shRNA的质粒转染细胞。LPS组和LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h；P＋LPS组和P＋LPS＋shRNA组于孵育24 h时加入终浓度为2 μg/ml的盐酸戊乙奎醚，孵育1 h后加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS再孵育1 h。采用Transwell法测定肺微血管内皮细胞通透性，采用Western blot法测定磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)的表达水平，采用免疫荧光染色法测定热休克蛋白27(HSP27)的表达水平，采用实时定量PCR法测定M₃受体mRNA的表达。

与C组比较，shRNA组M₃受体mRNA表达下调，LPS组细胞通透性增高，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27、和M₃受体mRNA表达上调(P<0.05)；与LPS组比较，P＋LPS组、LPS＋shRNA组和P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M₃受体mRNA表达下调(P<0.05)；与LPS＋shRNA组比较，P＋LPS＋shRNA组细胞通透性降低，p-p38 MAPK、p-ERK1/2、HSP27和M₃受体mRNA表达下调(P<0.05)。

盐酸戊乙奎醚减轻内毒素致人肺微血管内皮细胞通透性增高的机制与其下调M₃受体表达后抑制MAPK信号通路激活有关。