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摘要：目的 制定仁青芒觉胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱法对西红花、姜黄、丁香、木香、冰片进行定性鉴别。采用高效液相色谱法，CAPCELL PAK MG C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇∶0.01 moL/L磷酸二氢钾溶液（用10%磷酸调节pH值2.5）=25∶75，流速1.0 mL/min，检测波长为254、260 nm，柱温30 ℃，对马钱子碱、士的宁进行定量测定。结果 薄层色谱能定性检出西红花、姜黄、丁香、木香、冰片，斑点清晰，且阴性对照无干扰。马钱子碱在0.012 1～0.072 8 ?g范围内呈良好的线性关系，r=0.999 1，加样回收率为97.27%，RSD=1.20%；士的宁在0.045 4～0.272 4 ?g范围内呈良好的线性关系，r=0.999 8，加样回收率为98.69%，RSD=1.17%。结论 该方法操作简便、专属性、重复性好，可有效控制仁青芒觉胶囊的质量。
关键词：仁青芒觉胶囊；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；马钱子碱；士的宁
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.06.023
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）06-0072-04
Abstract：Objective To set up the quality standard of Renqing Mangjue capsules. Methods TLC was used for qualitative identification of Crocus sativus， Zingiberaceae， Syringa oblata， Radix Aucklandiae and Borneolum. The content of Brucine and Strychnine were determined by HPLC， which conducted with CAPCELL PAK MG C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）. The mobile phase consisted of methanol∶0.01 moL/L potassium dihydrogen phosphate （with 10% phosphoric acid to adjust the pH 2.5）=25∶75 and the flow rate was 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 254 nm and 260 nm. The column temperature maintained at 30 ℃. Results TLC could detect qualitatively Crocus sativus， Zingiberaceae， Syringa oblata， Radix Aucklandiae and Borneolum. The spots were clear and the negative controls had no interference. HPLC determined that Brucine presented a good linear relationship in the range of 0.012 1-0.072 8 μg （r=0.999 1）. The average recovery was 97.27%， RSD was 1.20%. Strychnine presented a good linear relationship in the range of 0.045 4-0.272 4 μg （r=0.999 8）. The average recovery was 98.69%， RSD was 1.17%. Conclusion The method is simple in operation. The results are accurate， reliable and good in reproducibility. The method can effectively control the quality of Renqing Mangjue capsules.
Key words：Renqing Mangjue capsules；quality standard；TLC；HPLC；Brucine；Strychnine
仁青芒觉是藏药中的常用名方，始载于十七世纪著名藏医药学家司徒·却吉琼乃编著的《盘德琼乃》。仁青芒觉胶囊现收载于国家食品药品监督管理局标准（YBZ07062005-2010Z），是由马钱子、毛诃子、木香、西红花、沉香、姜黄等上百味药材组成的复方制剂，具有清热解毒、益肝养胃、愈疮明目醒神、滋补强身等功效[1]，用于自然毒、配制毒等各种中毒症，“培根”、“木布”等疾病，急慢性胃溃疡、腹水、麻风病等[2]。由于其处方组成复杂，在质量控制上存在很大难度，尽可能多地对组方药材进行定性鉴别是提高其质量的可行方法，本研究对方中西红花、姜黄、冰片、木香、丁香采用薄层色谱法进行定性鉴别。目前，原标准对乌头碱、士的宁进行了薄层色谱法限量检查，但该法干扰较多，为了保证用药的安全性，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）建立了对仁青芒觉胶囊中马钱子碱、士的宁含量测定方法，从而对仁青芒觉胶囊进行有效的质量控制。
1 仪器与试药
Waters ALLiance e2695型高效液相色谱仪，资生堂CAPCELL PAK C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂），KH-500DE超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），上海梅特勒AE 240型分析天平（万分之一），德国Sartorius R200D型分析天平（十万分之一），CAMAG Scanner-3型薄层扫描仪；CAMAG ADC2自动展开系统。 士的宁对照品（批号110705-200306）、马钱子碱对照品（批号110706-200505）、西红花对照药材（批号121009-200502）、姜黄对照药材（批号1188-200101）、冰片对照品（批号110743-200504）、丁香对照药材（批号121039-200503）、胆酸对照品（批号0078-9312）、木香对照药材（批号921-9001）、去氢木香内酯（批号111525-200505）、丁香酚（批号110725-201112）均为中国药品生物制品检定所提供；仁青芒觉胶囊（批号100501、120001、130101）由甘肃省某藏药有限公司提供；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 西红花 取本品内容物1 g，加甲醇4 mL，密塞，振摇5～10 min，静置，上清液作为供试品溶液。另取西红花对照药材0.02 g，同法制成对照药材溶液。按照处方比例及工艺，取除西红花的其他药材制成阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品20 μL、对照药材溶液15 μL、阴性对照溶液20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（4∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点，阴性对照无干扰[3]。 2.1.2 丁香、木香 取本品内容物10 g，研碎，加无水乙醇50 mL，超声处理40 min，滤过，滤液浓缩至25 mL，加在中性氧化铝柱（100～120目，3 g，内径为1 cm）上，收集流出液，浓缩至5 mL，作为供试品溶液。另取丁香酚对照品，加无水乙醇制成每1 mL含10 μg的溶液；再取丁香对照药材2 g，同法制成对照药材溶液；取去氢木香内酯对照品，加三氯甲烷制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液；按照处方比例及工艺，分别取除丁香、木香的其他药材制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法
[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品15 μL、对照药材溶液5 μL，对照品溶液2 μL，阴性对照溶液15 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（38∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照无干扰。
2.1.3 冰片 取“2.1.2”项下供试品溶液，再取冰片对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液；取除冰片的其他药材制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品15 μL、对照品溶液2 μL、阴性对照溶液15 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（38∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照无干扰。 2.1.4 姜黄 取本品2 g，加乙醚30 mL，加热回流30 min，滤过，药渣挥干，加乙酸乙酯20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL、使溶解，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材0.2 g，加甲醇5 mL，超声处理10 min，静置，上清液作为对照药材溶液。取除姜黄的其他药材制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法
[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液10 μL、对照药材溶液2 μL、阴性对照溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（9.6∶0.8∶0.07）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同黄色荧光斑点，阴性对照无干扰。
2.1.5 胆酸 取本品内容物4 g，加丙酮20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加丙酮制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。另取除胆酸的其他药材制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品8 μL、对照品溶液4 μL、阴性对照溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-乙酸-甲醇（20∶25∶2∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热5 min，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱的位置上，显相同蓝色斑点，阴性对照无干扰。
2.2 马钱子碱、士的宁含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：资生堂CAPCELL PAK C18柱（4.6 mm×250 nm，5 μm）；流动相：甲醇∶0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（10%磷酸调pH值2.5）=25∶75；流速：1 mL/min：柱温：30 ℃；检测波长：254 nm（士的宁）、260 nm（马钱子碱）。
2.2.2 对照品溶液的制备 取马钱子碱和士的宁对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL含3.770 8 μg的马钱子碱对照品溶液（含量测定用）、每1 mL含4.856 4 μg的马钱子碱对照品溶液（线性关系考察用）、每1 mL含18.158 4 μg的士的宁对照品溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约0.9 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷50 mL与浓氨试液2 mL，密塞，轻轻振摇，称定质量，放置24 h，再称定质量，用三氯甲烷补足减失的质量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液20 mL置分液漏斗中，用硫酸溶液（3→100）振摇提取5次，每次20 mL，合并硫酸提取液，用浓氨试液调pH值至9～10，用三氯甲烷振摇提取5次，每次20 mL，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣用流动相溶解，转移至10 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过。取续滤液，即得。 2.2.4 阴性对照溶液的制备 取缺马钱子的样品，按“2.2.3”项下方法制成阴性对照溶液。
2.2.5 专属性试验 分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件测定，色谱图见图1。结果表明，马钱子碱、士的宁色谱分离良好，且阴性对照对测定结果无干扰。
2.2.6 线性关系考察 分别精密吸取士的宁、马钱子碱对照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积积分值为横坐标，对照品溶液的进样量（?g）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：士的宁Y=1.76×10-4X-2.07×10-3，r=0.999 8；马钱子碱Y=1.62×10-6X+7.01×10-3，r=0.999 1。结果表明，士的宁、马钱子碱分别在0.045 4～0.272 4 ?g、0.012 1～0.072 8 ?g范围内呈良好的线性关系。
2.2.7 精密度试验 分别精密吸取马钱子碱、士的宁对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定士的宁、马钱子碱峰面积，RSD分别为0.6%、1.3%，结果表明仪器精密度良好。
3 讨论
本试验采用CAMAG ADC2自动展开系统，对西红花、姜黄等药材进行定性鉴别研究，该法重复性好，专一性强，可作为仁青芒觉胶囊定性鉴别的依据。
文献[4]报道对仁青芒觉胶囊中的士的宁进行薄层色谱法限量检查，但干扰较多。本试验建立了HPLC测定仁青芒觉胶囊中马钱子碱、士的宁含量的方法，可稳定、准确、有效地对仁青芒觉胶囊进行质量控制。
本试验分别考察了甲醇、氯仿和碱化三氯甲烷作为提取剂的提取效率，并分别使用甲醇、流动相对回收溶剂至干后的残渣进行溶解、定容后进样，结果表明，使用碱性三氯甲烷作为提取剂，回收溶剂至干后再用流动相溶解定容，这种提取方法杂质干扰少。
对士的宁、马钱子碱进行全波长扫描后，确定其最大吸收波长分别为254、260 nm，故选择这2个波长作为检测波长。流动相的酸度对各峰的分离及保留时间有极大影响，采用酸性流动相可有效提高柱效，调节适当的pH值是分离各峰的关键因素，经多次试验，确定以甲醇∶0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（10%磷酸调pH值2.5）=25∶75作为流动相，可以使士的宁、马钱子碱得到基线分离，且无杂质干扰，峰形好。试验中还比较了Hypersil ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）和CAPCELL PAK C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱对结果的影响，结果表明使用后者操作时间短且峰形好。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：34-35.
[2] 古堆，赵军宁.藏医成方制剂现代研究与临床应用[M].成都：四川科学技术出版社，2009：470-471.
[3] 徐立民.薄层色谱法鉴别红花与复方中的西红花[J].首都医药，2000， 7（7）：25.
[4] 田薇，陈朝晖，李永民，等.薄层色谱法检查仁青芒觉胶囊中乌头碱、士的宁的限量[C]//甘肃省化学会成立六十周年学术报告会暨二十三届年会论文集，2003：419.
（收稿日期：2013-10-17；编辑：陈静）
关键词：仁青芒觉胶囊；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；马钱子碱；士的宁
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.06.023
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）06-0072-04
Abstract：Objective To set up the quality standard of Renqing Mangjue capsules. Methods TLC was used for qualitative identification of Crocus sativus， Zingiberaceae， Syringa oblata， Radix Aucklandiae and Borneolum. The content of Brucine and Strychnine were determined by HPLC， which conducted with CAPCELL PAK MG C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）. The mobile phase consisted of methanol∶0.01 moL/L potassium dihydrogen phosphate （with 10% phosphoric acid to adjust the pH 2.5）=25∶75 and the flow rate was 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 254 nm and 260 nm. The column temperature maintained at 30 ℃. Results TLC could detect qualitatively Crocus sativus， Zingiberaceae， Syringa oblata， Radix Aucklandiae and Borneolum. The spots were clear and the negative controls had no interference. HPLC determined that Brucine presented a good linear relationship in the range of 0.012 1-0.072 8 μg （r=0.999 1）. The average recovery was 97.27%， RSD was 1.20%. Strychnine presented a good linear relationship in the range of 0.045 4-0.272 4 μg （r=0.999 8）. The average recovery was 98.69%， RSD was 1.17%. Conclusion The method is simple in operation. The results are accurate， reliable and good in reproducibility. The method can effectively control the quality of Renqing Mangjue capsules.
Key words：Renqing Mangjue capsules；quality standard；TLC；HPLC；Brucine；Strychnine
仁青芒觉是藏药中的常用名方，始载于十七世纪著名藏医药学家司徒·却吉琼乃编著的《盘德琼乃》。仁青芒觉胶囊现收载于国家食品药品监督管理局标准（YBZ07062005-2010Z），是由马钱子、毛诃子、木香、西红花、沉香、姜黄等上百味药材组成的复方制剂，具有清热解毒、益肝养胃、愈疮明目醒神、滋补强身等功效[1]，用于自然毒、配制毒等各种中毒症，“培根”、“木布”等疾病，急慢性胃溃疡、腹水、麻风病等[2]。由于其处方组成复杂，在质量控制上存在很大难度，尽可能多地对组方药材进行定性鉴别是提高其质量的可行方法，本研究对方中西红花、姜黄、冰片、木香、丁香采用薄层色谱法进行定性鉴别。目前，原标准对乌头碱、士的宁进行了薄层色谱法限量检查，但该法干扰较多，为了保证用药的安全性，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）建立了对仁青芒觉胶囊中马钱子碱、士的宁含量测定方法，从而对仁青芒觉胶囊进行有效的质量控制。
1 仪器与试药
Waters ALLiance e2695型高效液相色谱仪，资生堂CAPCELL PAK C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂），KH-500DE超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），上海梅特勒AE 240型分析天平（万分之一），德国Sartorius R200D型分析天平（十万分之一），CAMAG Scanner-3型薄层扫描仪；CAMAG ADC2自动展开系统。 士的宁对照品（批号110705-200306）、马钱子碱对照品（批号110706-200505）、西红花对照药材（批号121009-200502）、姜黄对照药材（批号1188-200101）、冰片对照品（批号110743-200504）、丁香对照药材（批号121039-200503）、胆酸对照品（批号0078-9312）、木香对照药材（批号921-9001）、去氢木香内酯（批号111525-200505）、丁香酚（批号110725-201112）均为中国药品生物制品检定所提供；仁青芒觉胶囊（批号100501、120001、130101）由甘肃省某藏药有限公司提供；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 西红花 取本品内容物1 g，加甲醇4 mL，密塞，振摇5～10 min，静置，上清液作为供试品溶液。另取西红花对照药材0.02 g，同法制成对照药材溶液。按照处方比例及工艺，取除西红花的其他药材制成阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品20 μL、对照药材溶液15 μL、阴性对照溶液20 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（4∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点，阴性对照无干扰[3]。 2.1.2 丁香、木香 取本品内容物10 g，研碎，加无水乙醇50 mL，超声处理40 min，滤过，滤液浓缩至25 mL，加在中性氧化铝柱（100～120目，3 g，内径为1 cm）上，收集流出液，浓缩至5 mL，作为供试品溶液。另取丁香酚对照品，加无水乙醇制成每1 mL含10 μg的溶液；再取丁香对照药材2 g，同法制成对照药材溶液；取去氢木香内酯对照品，加三氯甲烷制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液；按照处方比例及工艺，分别取除丁香、木香的其他药材制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法
[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品15 μL、对照药材溶液5 μL，对照品溶液2 μL，阴性对照溶液15 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（38∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照无干扰。
2.1.3 冰片 取“2.1.2”项下供试品溶液，再取冰片对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液；取除冰片的其他药材制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品15 μL、对照品溶液2 μL、阴性对照溶液15 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（38∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照无干扰。 2.1.4 姜黄 取本品2 g，加乙醚30 mL，加热回流30 min，滤过，药渣挥干，加乙酸乙酯20 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL、使溶解，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材0.2 g，加甲醇5 mL，超声处理10 min，静置，上清液作为对照药材溶液。取除姜黄的其他药材制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法
[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液10 μL、对照药材溶液2 μL、阴性对照溶液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（9.6∶0.8∶0.07）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同黄色荧光斑点，阴性对照无干扰。
2.1.5 胆酸 取本品内容物4 g，加丙酮20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加丙酮制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。另取除胆酸的其他药材制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取供试品8 μL、对照品溶液4 μL、阴性对照溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-乙酸-甲醇（20∶25∶2∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热5 min，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱的位置上，显相同蓝色斑点，阴性对照无干扰。
2.2 马钱子碱、士的宁含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：资生堂CAPCELL PAK C18柱（4.6 mm×250 nm，5 μm）；流动相：甲醇∶0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（10%磷酸调pH值2.5）=25∶75；流速：1 mL/min：柱温：30 ℃；检测波长：254 nm（士的宁）、260 nm（马钱子碱）。
2.2.2 对照品溶液的制备 取马钱子碱和士的宁对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL含3.770 8 μg的马钱子碱对照品溶液（含量测定用）、每1 mL含4.856 4 μg的马钱子碱对照品溶液（线性关系考察用）、每1 mL含18.158 4 μg的士的宁对照品溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末约0.9 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷50 mL与浓氨试液2 mL，密塞，轻轻振摇，称定质量，放置24 h，再称定质量，用三氯甲烷补足减失的质量，充分振摇，滤过，精密量取续滤液20 mL置分液漏斗中，用硫酸溶液（3→100）振摇提取5次，每次20 mL，合并硫酸提取液，用浓氨试液调pH值至9～10，用三氯甲烷振摇提取5次，每次20 mL，合并三氯甲烷提取液，减压回收溶剂至干，残渣用流动相溶解，转移至10 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过。取续滤液，即得。 2.2.4 阴性对照溶液的制备 取缺马钱子的样品，按“2.2.3”项下方法制成阴性对照溶液。
2.2.5 专属性试验 分别精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件测定，色谱图见图1。结果表明，马钱子碱、士的宁色谱分离良好，且阴性对照对测定结果无干扰。
2.2.6 线性关系考察 分别精密吸取士的宁、马钱子碱对照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积积分值为横坐标，对照品溶液的进样量（?g）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：士的宁Y=1.76×10-4X-2.07×10-3，r=0.999 8；马钱子碱Y=1.62×10-6X+7.01×10-3，r=0.999 1。结果表明，士的宁、马钱子碱分别在0.045 4～0.272 4 ?g、0.012 1～0.072 8 ?g范围内呈良好的线性关系。
2.2.7 精密度试验 分别精密吸取马钱子碱、士的宁对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定士的宁、马钱子碱峰面积，RSD分别为0.6%、1.3%，结果表明仪器精密度良好。
3 讨论
本试验采用CAMAG ADC2自动展开系统，对西红花、姜黄等药材进行定性鉴别研究，该法重复性好，专一性强，可作为仁青芒觉胶囊定性鉴别的依据。
文献[4]报道对仁青芒觉胶囊中的士的宁进行薄层色谱法限量检查，但干扰较多。本试验建立了HPLC测定仁青芒觉胶囊中马钱子碱、士的宁含量的方法，可稳定、准确、有效地对仁青芒觉胶囊进行质量控制。
本试验分别考察了甲醇、氯仿和碱化三氯甲烷作为提取剂的提取效率，并分别使用甲醇、流动相对回收溶剂至干后的残渣进行溶解、定容后进样，结果表明，使用碱性三氯甲烷作为提取剂，回收溶剂至干后再用流动相溶解定容，这种提取方法杂质干扰少。
对士的宁、马钱子碱进行全波长扫描后，确定其最大吸收波长分别为254、260 nm，故选择这2个波长作为检测波长。流动相的酸度对各峰的分离及保留时间有极大影响，采用酸性流动相可有效提高柱效，调节适当的pH值是分离各峰的关键因素，经多次试验，确定以甲醇∶0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（10%磷酸调pH值2.5）=25∶75作为流动相，可以使士的宁、马钱子碱得到基线分离，且无杂质干扰，峰形好。试验中还比较了Hypersil ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）和CAPCELL PAK C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱对结果的影响，结果表明使用后者操作时间短且峰形好。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：34-35.
[2] 古堆，赵军宁.藏医成方制剂现代研究与临床应用[M].成都：四川科学技术出版社，2009：470-471.
[3] 徐立民.薄层色谱法鉴别红花与复方中的西红花[J].首都医药，2000， 7（7）：25.
[4] 田薇，陈朝晖，李永民，等.薄层色谱法检查仁青芒觉胶囊中乌头碱、士的宁的限量[C]//甘肃省化学会成立六十周年学术报告会暨二十三届年会论文集，2003：419.
（收稿日期：2013-10-17；编辑：陈静）