【摘 要】
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该研究优化冻存后脐血NK细胞的培养条件,构建了靶向CD19的CAR-NK细胞,并探究了CD19-CAR-NK对CD19+ B细胞淋巴瘤的杀伤作用。首先将冻存的脐血单个核细胞复苏并静置18 h,通过CD56磁珠纯化NK细胞,使其在CBMC中的比例从13.8%提高至96.6%。然后比较使用不同细胞因子及其组合对NK细胞增殖、分化、凋亡及功能的影响,发现IL-2和IL-15均能活化NK细胞,但IL-2培
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该研究优化冻存后脐血NK细胞的培养条件,构建了靶向CD19的CAR-NK细胞,并探究了CD19-CAR-NK对CD19+ B细胞淋巴瘤的杀伤作用。首先将冻存的脐血单个核细胞复苏并静置18 h,通过CD56磁珠纯化NK细胞,使其在CBMC中的比例从13.8%提高至96.6%。然后比较使用不同细胞因子及其组合对NK细胞增殖、分化、凋亡及功能的影响,发现IL-2和IL-15均能活化NK细胞,但IL-2培养时NK细胞增殖优于IL-15（P＜0.05）,IL-2+15下CD56dim NK亚群占比[（74.33±5.03）%]最多,凋亡[（4.6±0.14）%]最少,累计增殖（62.67±3.21）倍,显著优于其他细胞因子组合（P＜0.05）。该研究使用PDK1抑制剂BX795提高CAR-19慢病毒载体对NK细胞的转导效率,发现6 μmol/L BX795可将病毒转导效率提高3.6倍,且在此浓度下病毒转导效率[（36.4±1.91）%]最大。最后在体外验证CD19-CAR-NK对CD19+肿瘤细胞的杀伤能力,发现CD19-CAR-NK可增强NK细胞对Nalm6的杀伤作用,但不影响NK对Nalm6-CD19KO的杀伤。综上所述,该研究得出IL-2+15是冻存后脐血NK细胞的最佳细胞因子组合,被CAR修饰的NK细胞能特异性识别CD19抗原并杀伤CD19+肿瘤细胞。
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