【摘 要】
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目的 探讨Akt2/Bad信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)凋亡中的作用机制.方法 构建稳定过表达Bad同时稳定干扰Akt2的双病毒载体,将未感染慢病毒载体的H1299、H292、SPC-A1、H460
【机 构】
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川北医学院附属医院呼吸与危重症医学科,四川南充637000;南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院,四川南充637000;川北医学院,四川南充637000;四川大学华西医院呼吸与危重症医学科,四川成
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目的 探讨Akt2/Bad信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)凋亡中的作用机制.方法 构建稳定过表达Bad同时稳定干扰Akt2的双病毒载体,将未感染慢病毒载体的H1299、H292、SPC-A1、H460及SK-MES-1细胞为NSCLC组,阴性对照病毒转染NSCLC细胞为NC组;稳定干扰Akt2的NSCLC细胞为shAkt2组;稳定过表达Bad的NSCLC细胞为Bad组;稳定干扰Akt2表达的同时稳定过表达Bad基因的NSCLC细胞为shAkt2+Bad组.通过体外实验,观察共感染组细胞凋亡及侵袭能力的变化.应用Western-blot技术检测各组NSCLC细胞株Bad、Akt2以及凋亡相关信号蛋白BCL-2、BCL-XL、caspase-9、Cyto-c蛋白的表达水平.体内构建H1299及SPC-A1荷瘤裸鼠模型,观测瘤体重量,利用TUNEL染色比较Akt2/Bad信号通路对肺癌细胞凋亡的作用.结果 与NSCLC组比较,shAkt2+ Bad组细胞和移植瘤体中Akt2蛋白水平明显减少(P＜0.05),Bad蛋白水平显著增加(P＜0.05).shAkt2+ Bad组细胞凋亡率明显高于shAkt2组及Bad组(P＜0.05),H1299/SPC-A1体内荷瘤实验表明,shAkt2+ Bad组瘤体重量明显低于Bad组、NSCLC组及NC组(均P＜0.05),细胞凋亡率均高于其他3组(均P＜0.05).shAkt2和shAkt2+ Bad组caspase-9表达显著降低;Bad组、shAkt2组和shAkt2+ Bad组cyto-C表达显著增加,而BCL-2、BCL-XL在各组细胞中表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Akt2-Bad信号通路参与NSCLC的凋亡.
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