【摘 要】
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本研究以洛克沙胂（ROX）的结构类似物3-氨基-4-羟基苯胂酸（HAPA）为小分子半抗原,采用碳二亚胺法,分别将其与载体蛋白——牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联,制备免疫抗原HAPA-
【基金项目】
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国家科技支撑计划项目(2014BAD13B05);智汇郑州·1125计划项目
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本研究以洛克沙胂（ROX）的结构类似物3-氨基-4-羟基苯胂酸（HAPA）为小分子半抗原,采用碳二亚胺法,分别将其与载体蛋白——牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联,制备免疫抗原HAPA-BSA和检测抗原HAPA-OVA。经紫外光谱扫描及聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定后,以20μg/只剂量的HAPA-BSA免疫BALB/c小鼠;选择血清效价高、敏感性强的小鼠,取脾脏进行细胞融合,制备杂交瘤细胞株。利用间接ELISA法筛选得到1株可以稳定分泌抗ROX单克隆抗体的细胞株,命名为G12;间接ELISA法测定其细胞上清效价为1:512,间接竞争ELISA测定其半数抑制浓度IC50为3.147 ng/μL。经小鼠体内诱生腹水,辛酸-硫酸铵法纯化获得纯度较高的单克隆抗体,间接ELISA测定其效价为1:102 400,IC50为1.433 ng/μL,且具有良好的特异性。本试验成功合成了ROX人工抗原,并制备了可以分泌高敏感性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为ROX免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。
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