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[摘要] 目的 对不同产地黄芩样品中的主要有效成分进行对比研究。 方法 分别选取河北、内蒙古、甘肃三产地的黄芩样品进行分析，选用HPLC法对三组样品进行重复性、稳定性、回收率、线性关系考察及样品含量测定。 结果 三个产地的黄芩样品都具有很好的重复性、稳定性、回收率，黄芩样品中黄芩苷、汉黄芩苷的含量 河北>内蒙古>甘肃，而黄芩素、汉黄芩素的含量内蒙古>河北>甘肃。 结论 不同产地的黄芩样品中的主要成分不同，在制剂中应根据不同作用选择合适产地的黄芩入药。
[关键词] 黄芩苷；汉黄芩苷：黄芩素；汉黄芩素
[中图分类号] R284.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2014）23-79-03
资料显示[1]，黄芩别名山茶根、土金茶根，是唇形科黄芩属的一种多年生草本植物，药用部位取其干燥根，味苦、性寒、有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎功效。黄芩的临床抗菌应用效果优于黄连，并且没有抗药性，故在临床上应用广泛[2]。药用中应用的黄芩主要成分有黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷等，但由于产地不同，会导致黄芩中的成分的差异[3]，现对常用的河北、内蒙、甘肃三产地黄芩进行含量测定比较，将结果报道如下。
1 实验仪器与方法
1.1 实验仪器与试剂
Agilentl10高效液相色谱仪（配DAD检测器），色谱柱：DiamondC柱（以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）；测定黄芩中苷类以甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）为流动相；测定苷元类用甲醇-乙腈-0.4%的冰醋酸水溶液（30∶20∶50）为流动相；检测波长为280nm；流速10mL·min-1，柱温25℃，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。甲醇（色谱纯）；磷酸（分析纯）；水为超纯水；对照品黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素均购自中国药品生物制品检定所，纯度为99%。
药材黄芩药材分别选自河北、内蒙古、甘肃三地，经吉林省食品药品检验所鉴定均为唇形科植物黄芩的干燥根。
1.2 方法
1.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每lmL含60μg的溶液，用微孔滤膜过滤得对照品溶液。
1.2.2 供试品溶液的制备 参照2010版药典标准[4]，黄芩苷、汉黄芩苷供试品制备[5]：选自三个产地的黄芩分别在60℃减压干燥至恒重，过40目筛，精密称取样品0.3g。经加热回流、过滤、定容等操作制得供试品溶液。黄芩素、汉黄芩素供试品制备[6]：精密称取三产地的黄芩样品各自0.3g，过40目筛，60℃减压干燥至恒重，经提取、蒸发、溶解、定容等步骤制得。
1.2.3 重复性实验 取同一批次样品3份，按照上述供试品配制方法进行制备。
1.2.4 稳定性实验 取供试品溶液，分别于0、2、4、8、16h进样10μL，分别记录峰面积。
1.2.5 回收率实验 精密称取4份过40目筛的60℃减压干燥至恒重的黄芩样品0.15g，分别精密称取黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷对照品0.15g，按照2.2方法每份样品制成5份，测定4种主要成分的峰面积。
1.2.6 线性关系考察 线性关系考察：分别将4种对照品溶液1、2、3、4、5、6μL，依次进样。
1.2.7 样品含量测定 用液相摄谱仪，测定峰面积，带入回归方程计算含量，取3次测定结果的平均值。
1.3 统计学处理
采用SPSS17.0统计学软件进行数据分析，计量资料采用x2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 重复性试验
按2.7方法进行测定，依据结果计算RSD<3%，说明样品重复性很好。
2.2 稳定性实验
黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷RSD值分别为0.76%、0.97%、1.12%、0.62%，表明供试品在制备后16h内稳定。
2.3 回收率实验
测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的峰面积。平均回收率分别为99.6%、98.7%、99.5%、99.1%，RSD分别为0.89%、1.64%、0.96%、1.25%。
2.4 线性关系考察
得线性回归方程，见表1。
2.5 样品含量测定
用液相摄谱仪，测定峰面积，带入回归方程计算含量，取3次测定结果的平均值，P<0.05，具有统计学差异，见表2。
由表可看出：黄芩样品中黄芩苷、汉黄芩苷的含量 河北>内蒙古>甘肃，而黄芩素、汉黄芩素的含量内蒙古>河北>甘肃，P<0.05，差异具有统计学意义。
3 讨论
中药黄芩为多年生草本，根茎肥厚，肉质，径达2cm，伸长而分枝。黄芩抗旱力较强[7-8]。遇严重干旱或追肥后可适当浇水，一般不用常浇水。主要分布在中国河北、山西北部、内蒙古中东部及东北三省大部[9]。黄芩中含有多种黄酮类化合物，其主要活性成分是黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素。其活性成分的多寡也是评价黄芩优劣的指标[10-11]。
现代药理学指出，黄芩具有抗炎、抗菌、抗病毒、镇静、解毒、解热、降压等功效，黄芩煮水又具有清热止血效果，此外黄芩配山栀、桔梗、当归、人参等制成汤剂对糖尿病也有一定的疗效，在临床应用比较广泛。由于黄芩生长的地理位置，光照、土壤酸碱度及温度等因素的影响，所以不同产地的黄芩药材中的主要有效成分也有所差别[12]。
故本研究选取河北、内蒙古、甘肃三产地黄芩样品，按照《中国药典》2010版一部标准，对三产地样品进行黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷有效成分的测定，测定结果显示黄芩样品中黄芩苷、汉黄芩苷的含量河北>内蒙古>甘肃，而黄芩素、汉黄芩素的含量内蒙古>河北>甘肃，所以根据研究结果在临床制剂中应根据不同药用作用选择合适产地的黄芩入药。
[参考文献]
[1] 刘红宇，廖建萍，周新蓓，等.不同产地的黄芩野生药材与栽培药材质量比较[J].中国医药导报，2010，7（25）：37-39.
[2] 国家药典委员会.中国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：282.
[3] 田建红.不同产地黄芩中的有效成份含量分析[J].海峡药学，2009，21（3）：57-59.
[4] 马嘉，李蔚，韩晗.不同产地黄芩的质量对比[J].安徽医药，2012，16（2）：1759-1761.
[5] 徐丹洋，陈佩东，张丽，等.黄芩的化学成分研究[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（1）：78-80.
[6] 丁芳林，张雯杰，陈波，等.HPLC测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量[J].中国现代中药，2008，10（7）：25-27.
[7] 李韦，李化，杨滨，等.栽培黄芩和野生黄芩化学成分比较研究[J].中国中药杂志，2008，33（12）：1425-1428.
[8] 李玉山.黄芩的化学成分及黄芩苷的提取方法[J].西北药学杂志，2008，23（6）：410-411.
[9] 刘慧明.高效液相色谱技术及其在药物分析中的应用[J].中国现代医生，2007，45（20）：152-154.
[10] 温华珍，肖盛元，王义明，等.HPLC法测定不同规格并头黄芩的黄芩苷和汉黄芩苷含量J].中草药，2005，36（4）：600-602.
[11] 赵亮，王新霞，吕磊，等.HPLC法测定清肝散结颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素[J]. 中成药，2014，36（2）：313-318.
[12] 李春红，梅志强，何兵，等.HPLC同时测定龙胆泻肝制剂中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量[J].生物学通报，2012，47（4）：60-62.
（收稿日期：2014-10-21）
[关键词] 黄芩苷；汉黄芩苷：黄芩素；汉黄芩素
[中图分类号] R284.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2014）23-79-03
资料显示[1]，黄芩别名山茶根、土金茶根，是唇形科黄芩属的一种多年生草本植物，药用部位取其干燥根，味苦、性寒、有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎功效。黄芩的临床抗菌应用效果优于黄连，并且没有抗药性，故在临床上应用广泛[2]。药用中应用的黄芩主要成分有黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷等，但由于产地不同，会导致黄芩中的成分的差异[3]，现对常用的河北、内蒙、甘肃三产地黄芩进行含量测定比较，将结果报道如下。
1 实验仪器与方法
1.1 实验仪器与试剂
Agilentl10高效液相色谱仪（配DAD检测器），色谱柱：DiamondC柱（以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂）；测定黄芩中苷类以甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）为流动相；测定苷元类用甲醇-乙腈-0.4%的冰醋酸水溶液（30∶20∶50）为流动相；检测波长为280nm；流速10mL·min-1，柱温25℃，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。甲醇（色谱纯）；磷酸（分析纯）；水为超纯水；对照品黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素均购自中国药品生物制品检定所，纯度为99%。
药材黄芩药材分别选自河北、内蒙古、甘肃三地，经吉林省食品药品检验所鉴定均为唇形科植物黄芩的干燥根。
1.2 方法
1.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每lmL含60μg的溶液，用微孔滤膜过滤得对照品溶液。
1.2.2 供试品溶液的制备 参照2010版药典标准[4]，黄芩苷、汉黄芩苷供试品制备[5]：选自三个产地的黄芩分别在60℃减压干燥至恒重，过40目筛，精密称取样品0.3g。经加热回流、过滤、定容等操作制得供试品溶液。黄芩素、汉黄芩素供试品制备[6]：精密称取三产地的黄芩样品各自0.3g，过40目筛，60℃减压干燥至恒重，经提取、蒸发、溶解、定容等步骤制得。
1.2.3 重复性实验 取同一批次样品3份，按照上述供试品配制方法进行制备。
1.2.4 稳定性实验 取供试品溶液，分别于0、2、4、8、16h进样10μL，分别记录峰面积。
1.2.5 回收率实验 精密称取4份过40目筛的60℃减压干燥至恒重的黄芩样品0.15g，分别精密称取黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷对照品0.15g，按照2.2方法每份样品制成5份，测定4种主要成分的峰面积。
1.2.6 线性关系考察 线性关系考察：分别将4种对照品溶液1、2、3、4、5、6μL，依次进样。
1.2.7 样品含量测定 用液相摄谱仪，测定峰面积，带入回归方程计算含量，取3次测定结果的平均值。
1.3 统计学处理
采用SPSS17.0统计学软件进行数据分析，计量资料采用x2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 重复性试验
按2.7方法进行测定，依据结果计算RSD<3%，说明样品重复性很好。
2.2 稳定性实验
黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷RSD值分别为0.76%、0.97%、1.12%、0.62%，表明供试品在制备后16h内稳定。
2.3 回收率实验
测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的峰面积。平均回收率分别为99.6%、98.7%、99.5%、99.1%，RSD分别为0.89%、1.64%、0.96%、1.25%。
2.4 线性关系考察
得线性回归方程，见表1。
2.5 样品含量测定
用液相摄谱仪，测定峰面积，带入回归方程计算含量，取3次测定结果的平均值，P<0.05，具有统计学差异，见表2。
由表可看出：黄芩样品中黄芩苷、汉黄芩苷的含量 河北>内蒙古>甘肃，而黄芩素、汉黄芩素的含量内蒙古>河北>甘肃，P<0.05，差异具有统计学意义。
3 讨论
中药黄芩为多年生草本，根茎肥厚，肉质，径达2cm，伸长而分枝。黄芩抗旱力较强[7-8]。遇严重干旱或追肥后可适当浇水，一般不用常浇水。主要分布在中国河北、山西北部、内蒙古中东部及东北三省大部[9]。黄芩中含有多种黄酮类化合物，其主要活性成分是黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素。其活性成分的多寡也是评价黄芩优劣的指标[10-11]。
现代药理学指出，黄芩具有抗炎、抗菌、抗病毒、镇静、解毒、解热、降压等功效，黄芩煮水又具有清热止血效果，此外黄芩配山栀、桔梗、当归、人参等制成汤剂对糖尿病也有一定的疗效，在临床应用比较广泛。由于黄芩生长的地理位置，光照、土壤酸碱度及温度等因素的影响，所以不同产地的黄芩药材中的主要有效成分也有所差别[12]。
故本研究选取河北、内蒙古、甘肃三产地黄芩样品，按照《中国药典》2010版一部标准，对三产地样品进行黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷有效成分的测定，测定结果显示黄芩样品中黄芩苷、汉黄芩苷的含量河北>内蒙古>甘肃，而黄芩素、汉黄芩素的含量内蒙古>河北>甘肃，所以根据研究结果在临床制剂中应根据不同药用作用选择合适产地的黄芩入药。
[参考文献]
[1] 刘红宇，廖建萍，周新蓓，等.不同产地的黄芩野生药材与栽培药材质量比较[J].中国医药导报，2010，7（25）：37-39.
[2] 国家药典委员会.中国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：282.
[3] 田建红.不同产地黄芩中的有效成份含量分析[J].海峡药学，2009，21（3）：57-59.
[4] 马嘉，李蔚，韩晗.不同产地黄芩的质量对比[J].安徽医药，2012，16（2）：1759-1761.
[5] 徐丹洋，陈佩东，张丽，等.黄芩的化学成分研究[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（1）：78-80.
[6] 丁芳林，张雯杰，陈波，等.HPLC测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量[J].中国现代中药，2008，10（7）：25-27.
[7] 李韦，李化，杨滨，等.栽培黄芩和野生黄芩化学成分比较研究[J].中国中药杂志，2008，33（12）：1425-1428.
[8] 李玉山.黄芩的化学成分及黄芩苷的提取方法[J].西北药学杂志，2008，23（6）：410-411.
[9] 刘慧明.高效液相色谱技术及其在药物分析中的应用[J].中国现代医生，2007，45（20）：152-154.
[10] 温华珍，肖盛元，王义明，等.HPLC法测定不同规格并头黄芩的黄芩苷和汉黄芩苷含量J].中草药，2005，36（4）：600-602.
[11] 赵亮，王新霞，吕磊，等.HPLC法测定清肝散结颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素[J]. 中成药，2014，36（2）：313-318.
[12] 李春红，梅志强，何兵，等.HPLC同时测定龙胆泻肝制剂中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量[J].生物学通报，2012，47（4）：60-62.
（收稿日期：2014-10-21）