【摘 要】
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目的 探讨雷公藤甲素抑制类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like syn-oviocytes,RA-FLSs)的自噬与存活.方法 体外培养人RA-FLSs细胞,使用不同浓度的雷公藤甲素(0、10、20、30、40、50 ng/mL)处理RA-FLSs细胞,处理24、48、72 h后,采用CCK-8试剂盒测定RA-FLSs的增殖能力,确定对细胞增殖能力抑制50％时所需的雷公藤甲素浓度(半数最大抑制浓度,IC50).基于RA-FLSs增殖能力
【机 构】
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海南省安宁医院,海南海口 570206;海南省干部疗养院,海南海口 571100
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目的 探讨雷公藤甲素抑制类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like syn-oviocytes,RA-FLSs)的自噬与存活.方法 体外培养人RA-FLSs细胞,使用不同浓度的雷公藤甲素(0、10、20、30、40、50 ng/mL)处理RA-FLSs细胞,处理24、48、72 h后,采用CCK-8试剂盒测定RA-FLSs的增殖能力,确定对细胞增殖能力抑制50％时所需的雷公藤甲素浓度(半数最大抑制浓度,IC50).基于RA-FLSs增殖能力测定的实验结果,选取最佳雷公藤甲素作用浓度处理RA-FLSs,处理24、48、72 h后,检测RA-FLSs自噬荧光强度;采用Western blot检测LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclinl、Bax和caspase-3蛋白表达水平.结果 雷公藤甲素呈剂量依赖性的抑制RA-FLSs细胞的增殖,雷公藤甲素浓度为40 ng/mL时,细胞增殖活力显著下降(P＜0.001),24、48、72 h的IC50分别是42.31、40.71、42.71 ng/mL.因此后续的实验选用雷公藤甲素的上药浓度为40ng/mL.与空白组相比,40ng/mL雷公藤甲素作用RA-FLSs24、48、72h后,均能减弱LC3 Ⅱ自噬荧光、显著降低自噬蛋白LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、Beclin1表达水平(P＜0.05),显著增加凋亡蛋白Bax、cas-pase-3 表达水平(P＜0.05);且在处理48 h时,40 ng/mL雷公藤甲素抑制自噬及促进凋亡的作用较处理24 h及72 h强.结论 雷公藤甲素治疗类风湿性关节炎的作用机制可能与通过抑制RA-FLSs自噬,从而对RA-FLSs产生抑制增殖和促进凋亡作用.这一发现表明雷公藤甲素是一种治疗类风湿性关节炎的潜在药物.
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