论文部分内容阅读
目的：构建舡瑾因shRNA慢病毒表达载体，为研究SET在三氯乙烯毒性机制中的作用提供技术支持。方法：通过NCBI检索SET序列，设计合成5对shRNA片段，退火后连接到慢病毒载体pLVX—shRNAlvector。挑取筛选的单菌落，经PCR和测序鉴定后提取质粒。将质粒共转染到293T细胞，收集病毒上清，转导人L一02肝细胞中，利用嘌呤霉素筛选得到sET缺陷型细胞，最后利用荧光定量PCR和Westernblot鉴定干扰效果。结果：PCR和测序结果证明双链shRNA~确插入慢病毒载体pLVX—shRNAlve