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【摘 要】 目的：采用HPLC-MS/MS测定珠苏木丸中川楝素含量的方法。方法：采用WatersXBridge C18色谱柱（2.1mm×100mm，2.5μm），以乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶[KG-*3/5]69）为流动相；质谱使用电喷雾电离源（ESI）负离子模式，多反应检测（MRM）扫描方式检测，定性离子对为m/z 573/531和m/z 573/425。结果：川楝素对照品在0.002019～0.030285μg范围内与两个峰面积之和具有良好的线性关系（r=0.9998），平均加样回收率为99.7%，RSD=0.2%（n=6）。结论：该方法稳定、准确性好，可用于珠苏木丸中川楝素的质量控制。
【关键词】 川楝素；珠苏木丸；HPLC-MS/MS
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）16-0020-02
Abstract：Objective The content of toosendanin in Zhusumu Pill eas determined. Methods The HPLC-MS/MS analysis was performed on a column with octadecylsilance-bonded silica gel as the packing material， eluted with acetonitrile-0.01% formic acid solution （31∶69）. Negative ion mode of electrospray ionization source（ESI） by mass spectrometry， Multi-reaction detection（MRM） scanning method， qualitative ion pair is m/z 573/531 and m/z 573/425. Results There was a good linear relationship between 0.002019～0.030285μg in the injection volume of toosendanin（r=0.9998）， with the average recoveries were 99.7% and the RSD was 0.2%（n=9）. Conclusion The method is stable and accurate.It could be used for the quality control of Zhusumu Pill.
Keywords：Toosendanin；Zhusumu Pill；HPLC-MS/MS
珠蘇木丸是呼伦贝尔市人民医院制剂，由川楝子、公丁香、建莲子、紫檀香、水牛角浓缩粉、人工牛黄、麦冬、木香、诃子、川楝子、栀子、甘松十味药组成的复方制剂。具有清肝热，除“亚玛”病，解毒的功效，用于肝热胸膈，配毒症，“亚玛”病，腰肾损伤，尿频，尿血，尤其对血热引起的眼病有效。川楝子为该方中主要成份之一，对本方的临床疗效有重要作用，以川楝子中主要有效成分川楝素为定量监控指标可有效地控制产品的质量。本研究采用HPLC-MS/MS法测定其中川楝素的含量，方法稳定、准确性好，可作为质量控制的方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器 LCMS-8030液相色谱质谱联用仪（岛津公司）。
1.2 材料 川楝素（批号：111842-201503，含量96.8%，中国食品药品检定研究院），珠苏木丸（批号：20171208、20170606、20170612，呼伦贝尔市人民医院制剂室）。甲醇为色谱纯，水为高纯水，乙腈为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱：WatersXBridge C18柱（100mm×2.1mm，2.5μm）；流动相：乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶69）；进样量：5μL。
2.2 质谱条件 离子源：电喷雾电离源（ESI）；扫描方式：负离子模式；检测方式：多反应检测（MRM）扫描方式检测；DL温度：250℃；加热块温度：400℃；载气流速：3L/min；碎裂电压：-17.0V；定性离子对为m/z 573/531和m/z 573/425。
2.3 溶液的制备
2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取川楝素对照品适量，加甲醇制成每1mL含川楝素0.02019mg/mL，精密量取5mL对照品贮备液，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。
2.3.2 供试品溶液 取珠苏木丸，研细（过三号筛），取粉末1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3.3 阴性对照溶液 按照珠苏木丸的制备工艺制备不含川楝子的阴性对照样品，并按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。
2.4 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各5μL进行测定，结果：阴性对照色谱在川楝素两个峰保留时间处无干扰。结果如图1所示。
2.5 线性关系考察 精密吸取配制好的对照品溶液1、3、5、7、10、15μL分别进样。以两个峰面积之和为纵坐标，以对照品进样量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程为Y=55411545.7X-285.89，r=0.9998，川楝素进样量在0.002019～0.030285μg范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液5μL，重复进样6次，测得川楝素两个峰面积之和平均值为556976.5，RSD为0.5%，表明仪器的精密度良好。
2.7 重复性试验 取供试品（20171208）珠苏木丸供试品6份，按“2.2.2”项下方法操作，进行测定含量。结果川楝素含量的平均值（n=6）为57.6μg/g，RSD为0.4%，表明实验的重复性良好。
2.8 稳定性试验 取同一批号（20171208）珠苏木丸供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12，24h按上述色谱条件测定，测得川楝素峰面积的RSD（n=6）0.8%。结果表明供试品溶液室温放置24h内稳定。
2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品约0.8g，共6份，分别精密加入一定量的川楝素对照品溶液，按“2.2.2”项下方法操作，测定含量，并计算回收率。结果见表1。川楝素平均回收率（n=6）为99.7%。
2.10 样品测定 取珠苏木丸，按上述供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱测定，结果见表2。
3 讨论
参考《中国药典》2015年版一部川楝子的含量测定方法中的样品提取及色谱条件对珠苏木丸中川楝素进行分析，运用HPLC-MS/MS寻找出定量离子进行含量测定，此方法样品前处理简单、回收率高、专性强，可作为珠苏木丸的质量标准，能够有效控制样品的质量。
参考文献
[1]马永青，刘晓明，刘永利.UPLC-MS/MS法测定舒肝丸中川楝素的含量[J].药物分析杂志，2017，37（3）：545-549.
[2]周英，王慧娟，郭东贵，等.川楝子化学成分的研究（Ⅰ）[J].中草药，2010，41（9）：1421-1423.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：42.
[4]李丰，朱训，陈敏，等.川楝子化学成分研究[J].中药材， 2010， 33（6）：910-912.
（收稿日期：2018-06-06 编辑：程鹏飞）
【关键词】 川楝素；珠苏木丸；HPLC-MS/MS
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）16-0020-02
Abstract：Objective The content of toosendanin in Zhusumu Pill eas determined. Methods The HPLC-MS/MS analysis was performed on a column with octadecylsilance-bonded silica gel as the packing material， eluted with acetonitrile-0.01% formic acid solution （31∶69）. Negative ion mode of electrospray ionization source（ESI） by mass spectrometry， Multi-reaction detection（MRM） scanning method， qualitative ion pair is m/z 573/531 and m/z 573/425. Results There was a good linear relationship between 0.002019～0.030285μg in the injection volume of toosendanin（r=0.9998）， with the average recoveries were 99.7% and the RSD was 0.2%（n=9）. Conclusion The method is stable and accurate.It could be used for the quality control of Zhusumu Pill.
Keywords：Toosendanin；Zhusumu Pill；HPLC-MS/MS
珠蘇木丸是呼伦贝尔市人民医院制剂，由川楝子、公丁香、建莲子、紫檀香、水牛角浓缩粉、人工牛黄、麦冬、木香、诃子、川楝子、栀子、甘松十味药组成的复方制剂。具有清肝热，除“亚玛”病，解毒的功效，用于肝热胸膈，配毒症，“亚玛”病，腰肾损伤，尿频，尿血，尤其对血热引起的眼病有效。川楝子为该方中主要成份之一，对本方的临床疗效有重要作用，以川楝子中主要有效成分川楝素为定量监控指标可有效地控制产品的质量。本研究采用HPLC-MS/MS法测定其中川楝素的含量，方法稳定、准确性好，可作为质量控制的方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器 LCMS-8030液相色谱质谱联用仪（岛津公司）。
1.2 材料 川楝素（批号：111842-201503，含量96.8%，中国食品药品检定研究院），珠苏木丸（批号：20171208、20170606、20170612，呼伦贝尔市人民医院制剂室）。甲醇为色谱纯，水为高纯水，乙腈为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件 色谱柱：WatersXBridge C18柱（100mm×2.1mm，2.5μm）；流动相：乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶69）；进样量：5μL。
2.2 质谱条件 离子源：电喷雾电离源（ESI）；扫描方式：负离子模式；检测方式：多反应检测（MRM）扫描方式检测；DL温度：250℃；加热块温度：400℃；载气流速：3L/min；碎裂电压：-17.0V；定性离子对为m/z 573/531和m/z 573/425。
2.3 溶液的制备
2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取川楝素对照品适量，加甲醇制成每1mL含川楝素0.02019mg/mL，精密量取5mL对照品贮备液，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。
2.3.2 供试品溶液 取珠苏木丸，研细（过三号筛），取粉末1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3.3 阴性对照溶液 按照珠苏木丸的制备工艺制备不含川楝子的阴性对照样品，并按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。
2.4 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各5μL进行测定，结果：阴性对照色谱在川楝素两个峰保留时间处无干扰。结果如图1所示。
2.5 线性关系考察 精密吸取配制好的对照品溶液1、3、5、7、10、15μL分别进样。以两个峰面积之和为纵坐标，以对照品进样量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程为Y=55411545.7X-285.89，r=0.9998，川楝素进样量在0.002019～0.030285μg范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液5μL，重复进样6次，测得川楝素两个峰面积之和平均值为556976.5，RSD为0.5%，表明仪器的精密度良好。
2.7 重复性试验 取供试品（20171208）珠苏木丸供试品6份，按“2.2.2”项下方法操作，进行测定含量。结果川楝素含量的平均值（n=6）为57.6μg/g，RSD为0.4%，表明实验的重复性良好。
2.8 稳定性试验 取同一批号（20171208）珠苏木丸供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12，24h按上述色谱条件测定，测得川楝素峰面积的RSD（n=6）0.8%。结果表明供试品溶液室温放置24h内稳定。
2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品约0.8g，共6份，分别精密加入一定量的川楝素对照品溶液，按“2.2.2”项下方法操作，测定含量，并计算回收率。结果见表1。川楝素平均回收率（n=6）为99.7%。
2.10 样品测定 取珠苏木丸，按上述供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱测定，结果见表2。
3 讨论
参考《中国药典》2015年版一部川楝子的含量测定方法中的样品提取及色谱条件对珠苏木丸中川楝素进行分析，运用HPLC-MS/MS寻找出定量离子进行含量测定，此方法样品前处理简单、回收率高、专性强，可作为珠苏木丸的质量标准，能够有效控制样品的质量。
参考文献
[1]马永青，刘晓明，刘永利.UPLC-MS/MS法测定舒肝丸中川楝素的含量[J].药物分析杂志，2017，37（3）：545-549.
[2]周英，王慧娟，郭东贵，等.川楝子化学成分的研究（Ⅰ）[J].中草药，2010，41（9）：1421-1423.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：42.
[4]李丰，朱训，陈敏，等.川楝子化学成分研究[J].中药材， 2010， 33（6）：910-912.
（收稿日期：2018-06-06 编辑：程鹏飞）