【摘 要】
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目的 制备人内皮高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)多克隆抗体,检测EOLA1在人脐静脉内皮细胞(HUVEG)中的表达.方法 复性成功表达EOLA1的蛋白样品(样品1和2),二辛丁酸法检测2种蛋
【机 构】
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成都医学院第一附属医院烧伤整形科,四川省人民医院整形美容外科
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目的 制备人内皮高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)多克隆抗体,检测EOLA1在人脐静脉内皮细胞(HUVEG)中的表达.方法 复性成功表达EOLA1的蛋白样品(样品1和2),二辛丁酸法检测2种蛋白样品浓度,应用肽质量指纹图谱(PMF)分析法对2种样品进行验证.采用与理论肽段符合率高的EOLA1蛋白样品免疫4只小鼠,同时取4只未免疫小鼠作对照.采集各小鼠血液分离血清,应用饱和硫酸铵盐析沉淀法纯化EOLA1多克隆抗体,ELISA法分析效价(数据以吸光度值表示).蛋白质印迹法检测EOLA1在HUVEC中的表达.结果 蛋白样品1和2的浓度分别为0.124 16、0.132 15 mg/mL.PMF分析显示,样品1的理论肽段符合率为32%,样品2的理论肽段符合率为24%.选用蛋白样品1免疫小鼠,经检测抗体效价在1∶10 000以上;应用制备的EOLA1多克隆抗体可以检测到EOLA1蛋白在HUVEC中表达.结论 应用EOLA1原核表达蛋白免疫小鼠可以制备EOLA1多克隆抗体,并可用于检测EOLA1蛋白表达.
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