本研究在S19弱毒菌株的基础上通过一系列手段获得布鲁氏菌Bp26蛋白、Bmp18蛋白双缺失株,待遗传学鉴定合格后用于小鼠实验。将120只小鼠分为实验组、S19对照组和空白对照组3组,将双基因缺失株和S19弱毒株培养24 h后离心收集菌体,使用PBS清洗重悬后进行细菌计数,实验组小鼠腹腔接种检验合格的双基因缺失株5×10~5 CFU的剂量,病菌对照组腹腔接种S19弱毒菌株5×10~5 CFU的剂量,空白对照组腹腔注射同等体积的PBS溶液,观察分析Bp26蛋白做抗原的免疫原性、双基因缺失菌株的毒力情况和免疫应答情况。最终构建出能够区分自然免疫和人工免疫并具低毒性的布鲁氏弱毒菌株。双基因缺失株具有遗传稳定性,采用Bp26蛋白做抗原对3组小鼠的免疫原性测定,表明实验组40只小鼠均未表现出免疫原性,S19对照组40只小鼠中有28只表现出了免疫原性,占70%,空白对照组40只小鼠均未表现出免疫原性,双基因缺失株与原S19弱毒株的免疫应答基本一致,且更为安全。