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应用 ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ荧光染料检测方法构建 ＶＥＧＦ基因质粒标准品，能快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要候选基因血管内皮生长因子 （ＶＥＧＦ）的表达情况。本研究利用版纳微型猪近交系 ４～６月龄猪，提取皮肤创面总 ＲＮＡ，设计特异引物，进行 ＲＴ-ＰＣＲ扩增。纯化目的片段并与 ｐＭＤ１８-Ｔ载体连接，转化宿主菌 ＤＨ５α，提取重组质粒 ＤＮＡ，并经酶切、ＰＣＲ和测序鉴定，计算重组质粒原液拷贝数浓度并制备梯度浓度标准品，进行实时荧光定量 ＰＣＲ。建立的 ＶＥＧＦ基因 ｍＲＮＡ表达实时荧光定量