【摘 要】
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【背景】副猪嗜血杆菌可引起多种炎性反应和较高死亡率，其致炎机制目前尚不清楚。【目的】探究副猪嗜血杆菌外膜囊泡（outer membrane vesicles，OMVs）诱导RAW264.7细胞caspase-11及NLRP3炎性体活化的功能，以及caspase-11在OMVs活化炎性体通路诱导炎性因子表达过程中的关键作用。【方法】副猪嗜血杆菌OMVs感染RAW264.7细胞，收集6、12和24 h
【基金项目】
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国家自然科学基金（31772776）； 广东省自然科学基金（2020A1515010475）； 广东省科技专项资金（江科[2021] 183号）； 广东省现代农业产业技术体系创新团队项目（2021KJ119）； 广东省农业科学院学科团队建设计划（X
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【背景】副猪嗜血杆菌可引起多种炎性反应和较高死亡率，其致炎机制目前尚不清楚。【目的】探究副猪嗜血杆菌外膜囊泡（outer membrane vesicles，OMVs）诱导RAW264.7细胞caspase-11及NLRP3炎性体活化的功能，以及caspase-11在OMVs活化炎性体通路诱导炎性因子表达过程中的关键作用。【方法】副猪嗜血杆菌OMVs感染RAW264.7细胞，收集6、12和24 h细胞，RT-PCR检测caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达；收集感染后48 h细胞，Western blotting检测caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达。收集感染后6、12、24、48和72 h细胞上清，ELISA检测interleukin （IL）-1β和IL-18表达水平；不同浓度OMVs（0、2.5、10、25、50和100 μg/mL）感染RAW264.7细胞24 h，ELISA检测上清中IL-1β和IL-18水平。构建caspase-11沉默RAW264.7细胞株，收集OMVs感染后12、24和48 h细胞培养上清检测IL-1β和IL-18水平。【结果】Caspase-11 mRNA转录水平在OMVs感染6、12和24 h均极显著高于对照组（P＜0.01）；NLRP3 mRNA转录水平在感染后6和24 h极显著高于对照组（P＜0.01）；ASC mRNA转录水平在感染后12和24 h显著低于对照组（P＜0.05）；caspase-1 mRNA转录水平在感染后6、12和24 h显著高于对照组（P＜0.05）。Western blotting结果显示，与空白对照组相比，OMVs组caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达均明显升高。OMVs感染RAW264.7细胞后12、24、48和72 h，IL-1β表达量极显著高于对照组（P＜0.01），而且呈现时间依赖性升高，IL-18表达水平在感染后6、12、24、48和72 h显著高于对照组（P＜0.05）；不同浓度OMVs感染细胞时，OMVs对细胞的致炎作用呈现剂量依赖性增强。Caspase-11沉默后，IL-1β水平在感染后12、24和48 h显著低于未沉默组；Caspase-11沉默组IL-18表达量在感染后24和48 h均显著低于未沉默组（P＜0.05）。【结论】副猪嗜血杆菌OMVs在副猪嗜血杆菌诱导的炎症反应中发挥重要作用，OMVs可诱导RAW264.7细胞caspase-11介导的非经典NLRP3炎性体信号通路活化。
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