【摘 要】
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目的探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核起始因子2α(eIF-2α)/转录激活因子6(ATF6)通路与大鼠肝癌细胞增殖与迁移的关系。方法采用二乙基亚硝胺(DEN)间断给药法建立大鼠肝癌模型，苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏的形态学变化。采用免疫组织化学法检测大鼠肝癌组织中PERK和eIF-2α蛋白的表达；用无水乙醇诱导正常肝细胞(LO2)和高分化肝癌细胞株(CBRH-7919
【机 构】
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山西省人民医院肝胆外科二病区，太原 030012,山西省太原市中心医院急诊科 030009
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目的探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核起始因子2α(eIF-2α)/转录激活因子6(ATF6)通路与大鼠肝癌细胞增殖与迁移的关系。
方法采用二乙基亚硝胺(DEN)间断给药法建立大鼠肝癌模型，苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏的形态学变化。采用免疫组织化学法检测大鼠肝癌组织中PERK和eIF-2α蛋白的表达；用无水乙醇诱导正常肝细胞(LO2)和高分化肝癌细胞株(CBRH-7919)构建内质网应激细胞模型；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；采用划痕实验检测细胞的迁移和侵袭能力；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肝癌组织中PERK、eIF-2a、ATF6、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白的表达，应用SPSS 22.0统计软件分析，肝癌组织相关分析结果采用单因素方差分析和t检验。
结果无水乙醇诱导LO2和CBRH-7919细胞发生内质网应激后，LO2和CBRH-7919细胞细胞迁移能力显著降低，差异有统计学意义(tLO2细胞＝8.910，P<0.01；tCBRH-7919细胞＝30.010，P<0.01)。LO2和CBRH-7919细胞存活率显著降低，差异有统计学意义(tLO2细胞＝11.840，P<0.01；tCBRH-7919细胞＝19.080，P<0.01)。实验组肝癌组织内PERK、eIF-2a、ATF6、Caspase-3蛋白表达显著升高，bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK＝8.070，P<0.01；teIF-2a＝11.790，P<0.01；tATF6＝7.750，P<0.01；tbcl-2＝8.670，P<0.01；tCaspase-3＝7.720，P<0.01)。无水乙醇诱导LO2细胞发生内质网应激后，LO2细胞内PERK、eIF-2a、ATF6、bcl-2和Caspase-3蛋白表达量显著升高，bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK＝12.910，P<0.01；teIF-2a＝15.810，P<0.01；tATF6＝7.690，P<0.01；tbcl-2＝23.260，P<0.01；tCaspase-3＝22.280，P<0.01)。无水乙醇诱导CBRH-7919细胞发生内质网应激后，CBRH-7919细胞内PERK、eIF-2a、ATF6、bcl-2和Caspase-3蛋白表达显著升高，bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK＝9.560，P<0.01；teIF-2a＝12.400，P<0.01；tATF6＝6.880，P<0.01；tbcl-2＝13.840，P<0.01；tCaspase-3＝9.950，P<0.01)。
结论内质网应激PERK/eIF-2a/ATF4通路的激活，明显抑制大鼠肝癌细胞的增殖与迁移。
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