人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10在大肠埃希菌中的诱导表达与鉴定

来源 :解放军医学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：reap

【摘要】

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目的构建稳定表达人类泛素偶联酶E2C（UBF2C／UbcH10）蛋白的原核表达载体并在大肠埃希菌中诱导其表达，纯化并鉴定该重组蛋白。方法通过PCR扩增获得UbcH10基因，将其克隆至原核表达载

【作者】

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杜红延杨学习马奎黄湘王穗海李明

【机构】

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南方医科大学生物技术学院

【出处】

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解放军医学杂志

【发表日期】

：

2009年2期

【关键词】

：

泛素蛋白连接酶类原核表达克隆分子 ubiquitin protein ligases prokaryotic expression cloning

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目的构建稳定表达人类泛素偶联酶E2C（UBF2C／UbcH10）蛋白的原核表达载体并在大肠埃希菌中诱导其表达，纯化并鉴定该重组蛋白。方法通过PCR扩增获得UbcH10基因，将其克隆至原核表达载体pET32a（＋）中，构建重组表达载体，经EcoR I／Xho I双酶切及测序验证正确后，转化至大肠埃希菌BL21，经IPTG（终浓度Immol／L）诱导表达4h。采用SDS-PAGE、Western blotting等方法鉴定表达产物，用Ni-Sepharose亲和层析和Sephadex G-50分子筛纯化Ubc

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