观察胆绿素(BV)对离体肺缺血/再灌注损伤(LIRI)的保护作用,探讨BV在治疗LIRI中的机制。
方法将32只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LIRI组、还原型谷胱甘肽(GSH)组和BV治疗组,每组8只。采用离体肺灌流系统建立大鼠LIRI模型。灌流平衡15 min后,对照组继续灌流90 min;LIRI组、GSH组和BV治疗组停止灌流1 h后复灌90 min,后两组灌流液中分别加入4 mmol/L GSH和10 µmol/L BV。灌流过程中观察离体潮气量(VT)、肺静态顺应性(Cst)、动脉血氧分压(PaO2)、气道阻力(Raw)等肺功能指标。灌流结束后检测肺湿/干重比值(W/D);光镜下观察肺组织病理学改变;采用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)观察肺组织细胞凋亡情况,计算凋亡指数;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达。
结果与对照组相比,LIRI组于再灌注30 min起VT、Cst和PaO2即明显降低,Raw明显升高;LIRI组肺组织出现了不同程度充血水肿、炎性细胞浸润,支气管内皮损伤,W/D比值亦明显高于对照组(8.98±2.34比5.89±0.52,P<0.05);TUNEL检测显示,LIRI组棕黄色凋亡细胞数较对照组明显增多,凋亡指数明显高于对照组〔(13.88±2.35)%比(2.26±0.60)%,P<0.05〕;肺组织HO-1、p-JNK、caspase-3蛋白表达水平均明显高于对照组〔HO-1(灰度值):0.55±0.13比0.16±0.02,p-JNK(灰度值):0.46±0.08比0.16±0.05,caspase-3(灰度值):0.65±0.13比0.26±0.03,均P<0.05〕。与LIRI组相比,BV治疗组各项肺功能指标均明显改善,肺损伤程度明显减轻,且W/D比值明显降低(6.39±0.45比8.98±2.34,P<0.05),细胞凋亡指数明显降低〔(4.49±1.10)%比(13.88±2.35)%,P<0.05〕,且肺组织HO-1、p-JNK和caspase-3蛋白表达水平均显著降低〔HO-1(灰度值):0.19±0.03比0.55±0.13,p-JNK(灰度值):0.31±0.06比0.46±0.08,caspase-3(灰度值):0.33±0.05比0.65±0.13,均P<0.05〕,提示BV能通过抗凋亡有效减轻LIRI。BV对PaO2、凋亡指数、HO-1和caspase-3蛋白表达及JNK磷酸化的改善效果均优于阳性对照药物GSH,提示BV对LIRI有理想的保护作用。
结论BV能够有效减轻LIRI,且该保护作用可能与抑制JNK信号通路及抗凋亡有关。