【摘 要】
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目的:获得有活性的人谷氨酸脱羧酶65(human glutamate decarboxylase 65,hGAD65)用于Ⅰ型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)检测。方法:将hGAD65基因插入质粒pET32a(+)
【基金项目】
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上海市科委重大科技项目登山计划(06DZ19016)资助项目
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目的:获得有活性的人谷氨酸脱羧酶65(human glutamate decarboxylase 65,hGAD65)用于Ⅰ型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)检测。方法:将hGAD65基因插入质粒pET32a(+)中,与硫氧还蛋白(thioredox)及六聚组氨酸(hexahistidine)融合,由IPTG诱导融合蛋白(Trx-hGAD65)表达,经两次镍离子亲和层析纯化,通过薄层层析和ELISA研究hGAD65及Trx-hGAD65的活性。结果:在大肠杆菌中实现hGAD65的可溶性表达,经亲和层析得到较纯hGAD65和Trx-hGAD65蛋白,二者具有相同酶学活性,但Trx-hGAD65稳定性更高,并能检测出T1DM患者血清中的hGAD65抗体(hGAD65-Ab)。结论:Trx-hGAD65能在大肠杆菌中可溶性表达,从而为Trx-hGAD65用于T1DM诊断、预防和治疗打下基础。
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