【摘 要】
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目的探讨转染p53上调凋亡调控因子(PUMA)的人脑胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性增强的作用机制。方法将人脑胶质瘤细胞U87MG分为正常对照组、空载体组和实验组进行培养,分别将感
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目的探讨转染p53上调凋亡调控因子(PUMA)的人脑胶质瘤细胞对替莫唑胺敏感性增强的作用机制。方法将人脑胶质瘤细胞U87MG分为正常对照组、空载体组和实验组进行培养,分别将感染复数(MOI)=50的空载体腺病毒(Ad-△BH3)和携带PUMA的重组腺病毒(Ad-PUMA)转染U87MG细胞,转染后用MTT比色法测定各组细胞的存活率并计算替莫唑胺(TMZ)IC50,流式细胞仪检测细胞周期的变化,应用TUNEL法检测细胞的凋亡情况。Western blot检测凋亡相关蛋白p53、Bax的表达。结果外源性PUMA基因在Ad-PUMA转染U87MG48h后,随着时间延长,PUMA表达使U87MG细胞的增殖能力降低并诱导凋亡,转染24h、48h、72h的生长抑制率分别为17.3%、35.6%、43.3%,凋亡率分别为20.3%、31.4%、45.4%。正常对照组、Ad-PUMA、Ad-△BH3组细胞的TMZ IC50分别为(15.0±1.9)μmol/L、(2.3±0.1)μmol/L和(14.4±1.6)μmol/L。PUMA表达的U87MG细胞DNA合成受到抑制,周期阻滞在G2期;Western blot检测显示p53表达在各组中差异无统计学意义(P>0.05)、PUMA和Bax在实验组中表达较对照组强,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Ad-PU-MA转染可有效增强人脑胶质瘤细胞U87MG对TMZ的敏感性,抑制人脑胶质瘤细胞U87MG的增殖,通过诱导细胞G2期阻滞促进其凋亡,促凋亡机制不依赖于p53。
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