【摘 要】
：
采用载体介导的RNA干涉 (RNA interference,RNAi)技术抑制HEK293H细胞中外源报告基因的表达,并设置一系列的实验学控制以探讨其在RNAi应用研究中的价值及意义.运用pAVU6+27,
【机 构】
：
四川大学华西医院医学遗传学研究室、人类疾病基因组学研究室、人类疾病生物治疗国家重点实验室
论文部分内容阅读
采用载体介导的RNA干涉 (RNA interference,RNAi)技术抑制HEK293H细胞中外源报告基因的表达,并设置一系列的实验学控制以探讨其在RNAi应用研究中的价值及意义.运用pAVU6+27,构建了针对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的一系列短发夹RNA表达载体,并用脂质体法转染于HEK293H细胞中,检测EGFP mRNA及蛋白表达水平.瞬时转染48h后, RT-PCR及Western blot结果表明,针对EGFP三个靶点的干涉质粒均不同程度地抑制细胞内EGFP的表达,但仅转录正反义链、链内1-2个碱基错配的干涉载体不能介导特异的RNAi效应.此外,共转染实验结果表明干涉质粒两两间无相互增强或抑制的RNAi效应.在此基础上,通过G418筛选生成了HEK293H EGFP稳定表达株,在转染后不同时间点检测EGFP mRNA及蛋白表达变化,发现RNAi 效应在一定时间范围内呈现明显的时间依赖性.这些结果表明,有效的实验控制在RNAi研究中十分必要,具有重要的参考价值.基于载体表达的RNAi作用呈现明显的时间依赖性效应,为RNAi应用研究提供了一定的参考及借鉴价值.
其他文献
目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)体外诱导小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)ES-E14细胞分化为心肌细胞的作用。方法复苏的ESCs经直接悬浮法形成拟胚体(EBs),应用ICA
基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)是美国国立生物技术信息中心(NationalCenter for biotechnology information,NCBI)在2000年7月首次公布的基因表达相关数据的
目的 观察新型Nutlins类似物NL-86在体外诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用,并初步探讨其作用的分子机制.方法 采用MTT法检测NL-86化合物对HeLa细胞增殖的影响;用 FITC-Annexin V
Objective To investigate the possible involvement of erythropoietin (EPO)/erythropoietin receptor(EPOR) system in neovascularization and vascular regeneration i
目的 研究精胺对Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因表达的影响,并对其作用机理进行初步的探讨.方法 利用Real-time PCR检测正常小鼠和Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因的在mRN
目的 为了探讨维生素E对硫丹染毒ICR小鼠脾细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)和γ-干扰素(IFN-γ)基因转录的影响,我们设计了该实验.方法 将24只ICR小鼠随机分
介绍了污泥热水解预处理技术在促进细胞固体溶解、减小污泥粘滞性等方面的特性,着重阐述了Biothelys~(R)工艺的系统构成、工艺原理及其优越性,并结合工程运行实例对比分析了B
随着人类辅助生殖技术的迅速开展,如何提高妊娠成功率已成为该项技术面临的最大问题.胚胎着床的成功,除了胚胎的质量外,关键在于胚胎发育必须与子宫内膜同步化.近年来,关于子
红曲是一种天然食用色素的原料,具有抑菌防腐、降低血脂和预防心血管疾病等特殊的生理功能,将红曲用于食品中具有广阔的发展空间,而采用先进的技术分析其活性物质的组成及其
提出了一种以信噪比为优化目标的射频表面线圈的优化设计方法.在电磁分析中采用无穷大的均匀介质来近似模拟计算人体产生的噪声,以Fourier级数为基函数将线圈所在平面的源电