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目的 拟建立人胚胎干细胞无血清无饲养层的培养体系。方法将干细胞分别置于Knockout培养基（第1组）、自制无血清培养基（第2组）和添加BFGF及肝素的改良无血清培养基（第3组）中培养25代后观察比较3组干细胞形态学变化、克隆数目及大小。并借助细胞免疫组化、流式细胞术和体外拟胚体形成等方法检测干细胞的未分化状态和全能性。结果传代25次后，第2组克降逐渐分化。第1组和第3组的干细胞均呈典型的人胚胎干细胞形态特征；细胞表达Nanog，Oct-d，Tra-1-60，SSEA-4，但不表达SSEA-1；流式检测也