【摘 要】
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目的:亲水作用色谱-串联二级质谱法（HILIC-UPLC-MS/MS）鉴定知母中皂苷类成分。方法:采用亲水作用色谱柱Waters ACQUITY UPLC BEH Amide（2.1mm×100mm,1.7μm）,保护柱为Waters BEH Amide（2.1mm×5mm,1.7μm）,流动相为含10mmoL甲酸铵的0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）,梯度洗脱（0～5min,9
【机 构】
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贵州中医药大学中药民族药资源研究院
【基金项目】
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贵中医博士启动（No.[2021]01号）； 中央本级重大增减支项目（No.2060302）； 现代农业产业技术体系建设专项（No.CARS-21）； 贵州省高层次创新型人才项目（No.黔科合平台人才[2018]5638-2）； 贵州省科技创新人才
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目的:亲水作用色谱-串联二级质谱法（HILIC-UPLC-MS/MS）鉴定知母中皂苷类成分。方法:采用亲水作用色谱柱Waters ACQUITY UPLC BEH Amide（2.1mm×100mm,1.7μm）,保护柱为Waters BEH Amide（2.1mm×5mm,1.7μm）,流动相为含10mmoL甲酸铵的0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）,梯度洗脱（0～5min,95%～90%B;5～20min,90%～80%B;20～30min,80%～50%B）。结果:螺甾烷醇型对照品的保留时间明显小于呋甾烷醇对照品的保留时间,类似正向分配色谱,基于此可区分甾体皂苷的种类。分析CE=8eV的MS/MS谱,根据其中性损失的区别可鉴定该知母呋甾烷醇皂苷元C22位是否连有取代基及取代基的种类;分析CE=15eV的MS/MS谱,可根据其中性损失的区别鉴定该皂苷糖链中的戊糖、甲基戊糖、己糖及其组合,从而确定C3和C26糖链中糖基的种类及连接组成;分析CE=35eV的MS/MS谱,根据其特征裂解途径可确定其皂苷元的化学结构。通过对11个甾体皂苷对照品色谱行为和二级质谱裂解规律的总结,建立了基于HILIC-UPLC-MS/MS的甾体皂苷分析方法,鉴定了35个知母甾体皂苷,包括8个螺甾烷醇型甾体皂苷,27个呋甾烷醇型甾体皂苷,9个皂苷为反向色谱中未检测到的知母皂苷,经过SciFinder数据库查询,确定峰20和25为潜在的新化合物,峰1和13为首次在知母中发现。结论:运用亲水作用色谱串联三重四极杆质谱技术对知母中皂苷类成分进行较全面的分析,建立的分析方法在拓宽知母皂苷成分研究思路的同时,也为知母质量控制与临床应用提供借鉴。
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