莽草酸是抗流感有效药物"达菲"的前体物质。作者等之前的研究中,发现甘油作为碳源时重组大肠杆菌生物合成莽草酸的量最高,说明甘油代谢途径对莽草酸的生物合成有重要的影响,甘油激酶和3-磷酸甘油脱氢酶是大肠杆菌甘油代谢途径的关键酶,对它们进行克隆表达来研究甘油代谢途径对大肠杆菌生物合成莽草酸的影响。文章采用PCR方法从大肠杆菌DH5α基因组中扩增得到长度均为1.5 kb的甘油激酶基因(glpK)和3-磷酸甘油脱氢酶基因(glpD),并构建了重组表达载体pET-3b-glpD-glpK,转化E.coli BL21(DE3)后得到重组的E.coli BL21(DE3)-pET3b-glpD-glpK,并采用SDS-PAGE检测目的基因蛋白的表达。结果表明,glpK和glpD基因已成功构建到pET-3b-glpD-glpK质粒中,SDS-PAGE也检测到了目的基因的成功表达(55 k);同时,重组E.coli BL21(DE3)-pET3b-glpD-glpK的甘油消耗比出发菌株提高了16%,莽草酸积累量是出发菌株的3.5倍。