论文部分内容阅读
通过对4株伪狂犬病病毒（PRV）流行株进行比较,选择免疫原性最高的HNQYY2012为亲本株,利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统构建带有LoxP位点的HNQYY2012ΔgE/EGFP+,然后利用环化重组酶（Cre）去除增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因,构建PRV gE基因缺失株HNQYY2012ΔgE。PCR鉴定和测序结果表明,PRV gE基因缺失株构建成功;一步生长曲线表明,HNQYY2012ΔgE增殖速度慢于亲本株,但最高滴度与亲本株相近;HNQYY2012ΔgE和亲本株对小鼠的半数致死量分别为103.8 TCID50和102.5 TCID50,表明gE基因缺失株毒力降低。制备的灭活疫苗免疫小鼠能完全抵御5LD50和10LD50强毒攻毒。本文利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统成功构建PRV gE基因缺失株HNQYY2012ΔgE,为猪伪狂犬病灭活疫苗的研制提供了参考。