【摘 要】
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目的 制备HIV-1病毒感染因子(Vif)及其抗体.方法 用PCR技术从HIV-1 NL4.3cDNA质粒中扩增病毒感染因子(vif)基因,vif基因全长为579 nt(核苷酸),翻译成含192个氨基酸的蛋白质.
【机 构】
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北京工业大学生命科学与生物医学工程学院药理室,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肿瘤
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目的 制备HIV-1病毒感染因子(Vif)及其抗体.方法 用PCR技术从HIV-1 NL4.3cDNA质粒中扩增病毒感染因子(vif)基因,vif基因全长为579 nt(核苷酸),翻译成含192个氨基酸的蛋白质.将测序鉴定过的vif基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,Vif蛋白C端融合6×His标签便于纯化及鉴定.应用酶切鉴定、SDS-PAGE及Western Blot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性.间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度.结果 成功地获得了高纯度的Vif融合蛋白,纯度可达80%以上.用其制备多克隆抗体滴度可达1:204 800.结论 获得高纯度的Vif融合蛋白及其高效价的抗体.
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