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目的
体外观察白芷活性提取物对人皮肤成纤维细胞(Fb)生物学特性的影响,探讨其促进创面愈合的可能机制。
方法分离培养人正常Fb,按照随机数字表法分白芷活性提取物不同浓度组,以体积分数0.25%的新生牛血清DMEM为对照组。采用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度白芷活性提取物对体外培养的Fb增殖作用的影响。通过流式细胞仪、real-time PCR分别检测白芷活性提取物最适浓度培养条件下Fb的细胞周期变化以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达情况。
结果白芷活性提取物在5×10-4~5×10-2g/L浓度范围内可显著促进Fb增殖,呈剂量依赖性,不同浓度白芷活性提物培养液组测得吸光度(A)值分别为0.346±0.055、0.387±0.043和0.310±0.026,与对照组(0.273±0.042)比较,差异有统计学意义(t=3.36、5.79和2.49,P<0.05),其中在5×10-3 g/L浓度时测得A值最高,促增殖作用最为显著,为白芷活性提取物促进Fb增殖的最适合浓度。此浓度条件下白芷活性提取物可明显促进Fb通过G1/S及S/G2期限制点,S期(26.6±2.6)及G2/M期(7.4±1.3)细胞与对照组相比明显增多,G0/G1期细胞(66.3±4.5)与对照组相比明显减少(t=11.2、5.69、2.44,P<0.05)。5×10-3g/L白芷活性提取物组与对照组比较Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达明显上调(分别为1.61±0.26比1.00±0.16和3.36±0.40比1.00±0.14),差异有统计学意义(t=6.69、7.64,P<0.01)。
结论白芷活性提取物能显著促进Fb增殖,加快Fb细胞周期进程,同时可上调Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,可能与白芷促进创面愈合的机制有关。