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以牛分枝杆菌Vallee株基因组DNA为模板，应用PCR扩增获得了ESAT-6和CFP-10两个目的基因片段，采用重叠延伸剪接技术（SOE）将ESAT-6基因和CFP-10基因通过（Gly4Ser）3接头连接，得到了融合基因。将融合基因片段先克隆于pMD18-T载体，再亚克隆到表达载体pET32a（＋）中，通过限制性内切酶消化、菌液PCR鉴定、序列分析证实得到含预期序列的重组质粒pET-ESAT-6-CFP-10；该质粒转化BL21（DE3）；经IPTG诱导，表达出了40ku的融合蛋白；用Ni螯合层析方法