【摘 要】
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为了降低野生型葡激酶(wild-type staphylokinase,wt-Sak)的免疫原性,对已构建的葡激酶N端缺失突变体(△NSak)cDNA进行改造,将其主要的抗原决定簇编码序列突变为丙氨酸密码子
【机 构】
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上海医科大学分子遗传学研究室上海 200032
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为了降低野生型葡激酶(wild-type staphylokinase,wt-Sak)的免疫原性,对已构建的葡激酶N端缺失突变体(△NSak)cDNA进行改造,将其主要的抗原决定簇编码序列突变为丙氨酸密码子.该突变体(△NMSak)cDNA与原核表达载体pLY-4重组后,转化大肠杆菌JF1125.经温度诱导,△NMSak获得高效表达,重组蛋白占全菌总蛋白的60%,以包涵体形式存在.包涵体经洗涤,8mol/L尿素溶解,稀释复性,离子交换色谱一步分离至电泳纯,纯度达95%以上,分子量与理论值相符,比活性8.5×104HU/mg.经ELISA法、发色底物法测定,△NMSak与wt-Sak制备的兔抗wt-Sak抗血清的免疫反应性显著降低,经抗血清温育后,wt-Sak活性下降程度远高于△NMSak.△NMSak、Wt-Sak分别免疫豚鼠,以ELISA法测定豚鼠血清中相应抗体的效价,△NMSak组的抗体效价明显低于wt-Sak组,表明△NMSak的免疫原性显著下降.
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