【摘 要】
：
【目的】克隆并表达来源于苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)TCCC 11826的L-异亮氨酸羟化酶(L-isoleucine-4-hydroxylase,IDO),测定重组IDO酶学特性并构建用于4-羟基异
【基金项目】
：
国家自然科学基金(31300069);天津市科技支撑计划重点项目(12ZCZDSY01900)~~
论文部分内容阅读
【目的】克隆并表达来源于苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)TCCC 11826的L-异亮氨酸羟化酶(L-isoleucine-4-hydroxylase,IDO),测定重组IDO酶学特性并构建用于4-羟基异亮氨酸(4-Hydroxyisoleucine,4-HIL)微生物转化的重组菌株,以考察该酶在4-HIL合成中的潜在应用价值。【方法】以B.thuringiensis TCCC 11826基因组为模板PCR扩增ido基因并构建该基因过表达菌株BL-IDO;采用Ni-NTA亲和层析法分离纯化重组IDO后检测其酶学特性;构建重组株菌W3110-IDO进行4-HIL的微生物转化。【结果】克隆B.thuringiensis TCCC 11826的ido基因,测序结果显示该基因含723个核苷酸,编码240个氨基酸,与已报道的B.thuringiensis 2-e-2的ido基因相似度分别为97.47%和97.91%。此IDO含有His1-X-Asp/Glu-Xn-His2基序,属于Fe2+和α-酮戊二酸依赖型羟化酶家族;酶学实验表明该酶能够特异性地催化L-异亮氨酸生成(2S,3R,4S)-4-HIL,其Km和Vm ax分别为0.18 mmol/L和2.10μmol/min/mg,最适反应温度和pH分别为35℃和7.0,该酶于35℃条件下放置5 h后仍具有85.1%的活性;在Escherichia coli W3110中过表达重组IDO,在未经优化条件下4-HIL最高转化率达89.28%。【结论】获得IDO编码基因序列(Accession No.KC884243)并首次较为系统地研究了其酶学特性,该酶反应条件温和且具有较高的活性及稳定性,在酶法或微生物转化法合成4-HIL中有较广泛的应用价值。本研究可为4-HIL及其它氨基酸衍生物的生物制造技术奠定理论基础。
其他文献
2020上海将成为与我围经济实力以及人民币国际地位相适应的国际金融中心。借势上海国际金融中心的建设，嘉定政府积极进行建设金融硅谷。打造上海金融副中心的发展规划。深圳联
《人民胜利万岁》是为迎接新中国而创作的一部大型歌舞作品,它以解放区的民间歌舞为基础建构了胜利的新中国形象,是民间歌舞艺术第一次系统建构现代国家形象,标志着民间艺术
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”＄ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’＃陈川个美食
Back to yield
目的对比分析在治疗早期股骨头坏死疾病中应用两种不同方法的临床效果。方法本文研究对象选取我院在2017年3月—2019年7月期间收治的104例早期股骨头坏死患者,采取抽签法进行
目的研究消毒供应室对再生医疗器械的全程质控管理效果。方法选取我院在2018年1月-2019年12月期间使用的700套再生医疗器械为研究对象,2018年1月-2018年12月期间未施行全程质
折臂式随车起重机是集货物装、卸及运输功能于一体的专用起重设备。随车起重机的作业执行主要是由它的工作机构实现的。这种工作机构的杆长设计对起重机的传力性能、起重特性
研究了一种基于二维Logistic混沌映射的离散小波变换(discrete wavelet transform,DWT)数字水印算法。该算法提出了一种利用二维Logistic混沌映射打乱原始图像像素点位置的置乱加密方法,用这种加密方法对水印图像做预处理操作,对原始载体图像做三级小波分解,在第三级小波分解后的水平高频和垂直高频子带中绝对值较大的系数中嵌入水印信息,把改变的系数和原小波系数重构后再做逆
目的：评价黄芪注射液治疗不稳定型心绞痛的疗效与安全性。方法：计算机检索MEDLINE、EMbase、Cochrane图书馆、CNKI、VIP和万方数据库，按照纳入与排除标准由两位研究者独立筛选和
民主路小学始建于1955年,是徐州市第一所实验小学,第一所省重点小学。培养了包括全市第一位省特级教师孙秀英在内的5位省特级教师,荣获“全国基础教育课程改革示范校”“中央
本文通过对飞利浦Allura Xper FD20大型数字减影血管成像系统（DSA）日常使用中遇到的故障进行分析，总结出一套适用于该设备的维护方法，以减少设备故障，增加设备的使用寿命。