T型钙离子通道α1H亚型在先天性巨结肠大鼠模型病变肠段的分布及功能变化

来源 :中华儿科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sophia_hou
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目的 研究T型钙离子通道α1H亚型(Cav 3.2)在先天性巨结肠大鼠模型发生发展中的作用.方法 将80只6~8dSD乳鼠通过随机数字表法分为两组,每组40只.模型组经肛门灌注0.2%苯扎氯铵建立先天性巨结肠模型,对照组用生理盐水作为替代.分别在4、6、8周每组随机抽取10只乳鼠处死,通过大体形态学观察、组织病理学观察、免疫荧光的方法来鉴定先天性巨结肠模型是否建立成功.同时通过免疫组织化学、蛋白免疫印迹和免疫荧光双标技术检测模型大鼠病变肠段中Cav 3.2的分布变化及其与Cajal间质细胞特异性标志物c-kit共变情况;离体肌条组织电生理检测模型大鼠病变肠段及干预Cav 3.2后的变化.组间数据资料采用t检验.结果 处理后8周通过大体形态学观察,组织病理学观察,免疫荧光方法鉴定先天性巨结肠模型建立成功,即处理肠段肌间神经节细胞的减少甚至缺如.免疫组织化学检测Cav 3.2在模型大鼠病变肠段的分布,对照组结肠组织Cav 3.2主要分布于环行肌与纵行肌之间,多呈连续分布;模型组随着处理时间的延长,狭窄段组织Cav 3.2的分布逐渐减少,连续性遭到破坏.蛋白免疫印迹检测处理后大鼠Cav 3.2蛋白表达的变化,结果与免疫组化检测一致,随着处理时间的延长,Cav 3.2的表达逐渐减少,8周时减少最明显.处理后4、6、8周模型组Cav 3.2的相对表达量分别为0.63±0.06、0.38 ±0.06、0.26±0.07;对照组分别为0.63±0.06、0.62±0.09、0.63±0.06,两组在处理后6、8周相比,差异均有统计学意义(t值分别为5.27和8.63,P值均<0.05);Cav 3.2和c-kit共变情况分析显示,与对照组相比,狭窄段组织c-kit和Cav 3.2的共同阳性区域明显减少甚至消失.离体肌条组织电生理结果发现:与对照组相比,模型组狭窄段组织的自发性节律性收缩波基本消失;而在对照组产生自发性节律性收缩的前提下,加入Cav 3.2的特异性阻滞剂ZnCl2后,肌条的节律性收缩基本消失,与模型组表现类似.结论 Cav 3.2亚型的异常很可能介导了先天性巨结肠疾病状态下Cajal间质细胞功能的改变,并最终导致肠功能障碍.
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