【摘 要】
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将化学法合成的apoAⅠ基因插入分泌型载体pPIC9K .将重组的pPIC9K-apoAⅠ用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115 菌株,筛选获得G418高抗性转化子. 转化子经摇瓶发酵和甲醇
【基金项目】
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复旦大学校科研和教改项目;上海市科委资助项目
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将化学法合成的apoAⅠ基因插入分泌型载体pPIC9K .将重组的pPIC9K-apoAⅠ用BglⅡ酶切后,转化Pichia pastoris GS115 菌株,筛选获得G418高抗性转化子. 转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导,上清液用SDS-PAGE检测,有明显的rApoAⅠ表达. 经Phenyl-sepharose 6(Fast Flow)疏水层析柱和Sephadex G-50(coarse)分子筛层析,得到rApoAⅠ蛋白纯品. 经Western blotting,N末端氨基酸顺序测定证明,毕赤氏酵母表达的rApoAⅠ与人血浆提取的ApoAⅠ基本一致.
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