构建反转录病毒小向导RNA表达载体用于小鼠T细胞基因功能研究

来源 :上海交通大学学报:医学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：chunhuaqiuyue

【摘要】

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目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转

【作者】

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赵艳娜邱荣沈南唐元家

【机构】

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上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科,中国科学院大学上海营养与健康研究所

【出处】

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上海交通大学学报:医学版

【发表日期】

：

2020年12期

【关键词】

：

CRISPR/Cas9 Cas9转基因小鼠反转录病毒载体 TH17细胞分化 CRISPR/Cas9 Cas9 transgenic mouse retrovi

【基金项目】

：

国家自然科学基金(81871287,31630021),上海交通大学医学院高水平地方高校创新团队(SSMU-ZDCX20180100)

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目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转录病毒载体(MSCV-LTR-miR30-PIG,LMP)经过Xho1和Sal1双酶切后,回收得到反转录病毒载体骨架。以慢病毒sgRNA表达载体为模版,通过PCR扩增获得U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段。利用同源重组将U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段组装

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