论文部分内容阅读
目的
探索大肠埃希菌(Escherichia coli, E．coli) FtsZ突变体FtsZP74R、FtsZG77D和FtsZA81R对FtsZ功能和胞内自身组装的影响。
方法利用分子克隆和定点突变技术，常规构建带His或YFP标签的FtsZ及其突变体融合表达质粒，亲和纯化得到相应的蛋白；采用同源重组技术构建FL37(△ftsZ-Cat)菌株； 活细胞成像观察FtsZ及其突变体在胞内定位模式；免疫共沉淀试验检测FtsZ与其突变体间的相互作用；光扫描检测定点突变对FtsZ组装特性的影响；高压液相色谱法检测FtsZ突变体GTPase酶活性的变化。
结果FtsZP74R、FtsZG77D和FtsZA81R突变体在E.coli内不能正确定位和形成功能性Z环、FtsZ-FtsZ*单体间的相互作用减弱或消失、突变体体外聚合效率减少及FtsZA81R的GTPase酶活性显著降低。
结论P74、G77和A81是影响FtsZ功能和胞内正确组装的重要氨基酸；A81可同时影响FtsZ的侧面相互作用和GTPase活性。