【摘 要】
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旨在建立检测猫疱疹病毒Ⅰ型（Feline herpesvirus 1,FHV-1）、猫杯状病毒（Feline calicivirus, FCV）、支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）多重TaqMan荧光定量PCR方法。基于FHV-1的胸苷激酶（TK）基因、FCV的衣壳蛋白VP1基因、Bb的皮肤坏死毒素基因（DNT1）序列保守区域设计并合成TaqMan荧光定
【基金项目】
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江苏农牧科技职业学院项目（NSF2021ZR11）； 国家自然科学基金青年基金项目（32002157）；
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旨在建立检测猫疱疹病毒Ⅰ型（Feline herpesvirus 1,FHV-1）、猫杯状病毒（Feline calicivirus, FCV）、支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）多重TaqMan荧光定量PCR方法。基于FHV-1的胸苷激酶（TK）基因、FCV的衣壳蛋白VP1基因、Bb的皮肤坏死毒素基因（DNT1）序列保守区域设计并合成TaqMan荧光定量PCR引物和探针，以FHV-1、FCV、Bb、猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌为模板验证引物和探针的特异性。制备重组质粒pMD18T-FHV-TK、pMD18T-FCV-VP1、pMD18T-Bb-DNT1作为标准品，经矩阵法确定最佳反应体系。以10倍梯度稀释的标准品为模板检测方法的灵敏性。应用建立的方法对32份临床具有上呼吸道感染症状的猫眼、口、鼻拭子检测，以评估该方法的可行性。结果显示：该方法可特异性检出FHV-1、FCV、Bb,且与猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌无交叉反应；灵敏度试验表明该方法对FHV-1、FCV、Bb的最低检出限分别为10、10和100拷贝/μL;应用该方法从32份猫临床样品中检测出FHV-1阳性11份、FCV阳性21份、Bb阳性4份，并经PCR测序验证。本研究初步建立了FHV-1、FCV、Bb多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，具有特异性强、敏感性高的特点，为临床猫上呼吸道疾病病原的分子检测提供参考。
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