ELISA是指酶联免疫吸附试验，检测HIV抗体时可使用血液、唾液、尿液样品，HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果，试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定，经过6年的HIV抗体检测工作，总结体会如下。
　　 造成白板的原因
　　 白板现象：阳性对照孔及室内质控孔不显色或显色淡，OD值达不到试剂盒说明书阳性对照值的范围。2010年初使用某试剂厂商试剂时发现白板现象，分析原因是试剂厂商未包被好微孔板。另外操作者错加、漏加底物缓冲液或底物液也是造成白板现象的原因。
　　 造成花板的原因
　　 花板现象：阴性对照、阳性对照及室内质控孔结果符合试剂盒要求，而大多数标本孔的OD值却明显偏高。经过6年的实践过程，笔者认为最关键的原因有洗板机洗板是否干净；整个实验过程中使用新鲜符合要求的蒸馏水或超纯水(电导率＜1.5us/cm)；洗板之后最好选择干净的吸水纸包裹严微孔板，然后轻轻拍干一次。
　　 可以说在ELISA操作中，洗板是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，应严格要求洗板，半自动与全自动洗板机使用不当也会影响结果，血清中残留的纤维蛋白原或洗涤液析出的结晶使洗板机两排针针孔全阻塞或半阻塞状态，造成未结合标记酶洗脱不彻底，易产生拖带现象，导致辞“花板”，所以在操作洗板机过程中要不时观察洗板机针孔内洗液的通畅状况，保证洗板针畅通、洗液注满各孔、洗液残留量最少，使孔内液体被洗板针吸得越干净洗涤效果最好，检查残留洗液体积(双抽吸)＜2UL/每孔，即可确定孔内液体被洗板机吸得干净。另外，抽吸系统的工作依靠强力真空泵，若真空泵不清洁或有障碍时易造成孔内液体大量残留，这时要请专业工程师来处理。
　　 洗板机不用时应用新鲜蒸馏水或超纯水清洗几遍，洗液如果结晶应待其融解后配制。封板时，各孔一定要被封板膜封严，防止阳性标本的液体蒸发产生周边现象而导致“花板”现象。
　　 造成黄板的原因
　　 黄板现象：终止液加过后，整板结果显现均一的黄色或淡黄色。实践中，笔者认为重要的原因是未能使用新鲜、高质量的蒸馏水，另外盛放显色剂容器的污染；显色剂在光照下放置过久；孵育温度过高或孵育时间过长；洗板时每孔未注满洗液，都易造成黄板现象。
　　 操作中将盛放显色剂的容器彻底洗干净，显色剂未使用前避光放置，孵育温度应控制在37±1℃，孵育时间严格按试剂说明书操作。
　　 外部对照质控血清的制备
　　 由于试剂商销售的外部质控血清较贵，为了节约成本，通常分4个步骤自己制备：①收集阴性血清：收集公共场所健康人体检所剩的清亮、未溶血、并经HAV、HCV、HEV及HIV检测阴性，56℃ 30分钟灭活、离心10分钟后的血清。②收集阳性血清：收集试剂盒内的阳性对照血清。③用阴性血清等比稀释阳性血清，已混合的阳性血清(PC)100UL+阴性血清(NC)100UL。从以上血清中提取100UL加入到阴性血清(NC)100UL中，以此类推，稀释比为1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128等，将7个样本分别加入微孔中，测得OD值，外部对照质控血清要求为OD值接近CUTOFF值的2～3倍，如选1:8样本。④稀释比为1:8的血清配备：取2ml阳性对照血清+14ml阴性血清混匀，分装小冻存管，每管100UL，-20℃可长期保存，但不能反复冻溶。
　　 实践经验
　　 操作经验：实验前将戴乳胶手套的手放在流动水中冲洗，冲洗掉手套上的滑石粉，以免造成假阳性。若酶标仪采用双波长，则加样时不加空白孔，注意一定要垂直加样，使样品完全加入孔底。当样品加入微孔板内在37℃水浴放置60分钟后，将微孔板取出后，先不要着急洗板，用移液器将外部质控血清和阳性对照血清孔内液体全部吸净，再洗板。
　　 仪器维护经验：①水堵：清洗头进液管和排液管水堵塞，洗板针不出液，则开启仪器后方看到洗液电磁阀，将电磁阀上的硅胶管慢慢取下，轻轻揉搓后重新放置原位。②针堵：若发现洗板针短针不吐水，或水滴答滴答流下来，则轻柔地捅针孔，最好8针孔全部捅捅，若出现捅第1孔，则相邻第2孔堵；捅第2孔，则相邻第3孔堵，以此类推，则说明孔内结晶及其他物质不能马上融化，造成相邻各孔此起彼伏堵针孔，这时将清洗头两侧顶端的封闭螺丝拧下，用新鲜的蒸馏水或超纯水冲洗洗液管道和排液管道。