体外扩增脐血间充质干细胞的生物学特性和诱导分化能力的研究

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目的

从脐血中分离单个核细胞(MNCs),体外培养扩增间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学特性和诱导分化潜能。

方法

取35份足月顺产新生儿脐血,密度梯度离心法分离出其中的MNCs,采用含胎牛血清的DMEM培养基体外培养扩增MSCs。显微镜下观察MSCs的形态、细胞化学染色,流式细胞仪测定MSCs的细胞免疫表型,体外诱导分化实验检测MSCs分化成骨细胞、脂肪细胞和神经细胞的能力。

结果

从12份脐血中可培养出MSCs,形态上与从其他来源的MSCs类似,可传至20代而无形态上的变化。细胞化学染色示碱性磷酸酶(ALP)阴性,非特异性酯酶——α-丁酸萘酚酯酶(alpha-naphthol butyric acid esterase,NBE)阳性。其表达CD29、CD44和CD105,特别是人类MSCs标记SH-2和SH-3阳性,而CD3、CD14、CD19、CD34和CD45阴性,说明它们并非来自造血细胞。这些MSCs在适当诱导分化剂的作用下,2周左右可以诱导分化形成骨细胞, 20天左右可以诱导分化形成脂肪细胞。脐血MSCs预诱导12 h后,胞体发生收缩,细胞边缘有细的突起。正式诱导5 h后大多数细胞呈现典型的神经元样。

结论

胎儿脐血MNCs可分离培养出MSCs。这些MSCs具有与其他来源MSCs类似的表型及分化潜能。

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