【摘 要】
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目的 探讨艾滋病痴呆综合症(AIDS dementia complex,ADC)患者体内外周和中枢不同组织部位的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)反式激活因子(tat)第一外显子基因序列的变异并对其进
【机 构】
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山东大学公共卫生学院微生物检验研究所,济南,250012;山东大学校医院,济南,250100;山东大学公共卫生学院微生物检验研究所,济南250012;教育部实验畸形学重点实验室,济南250012
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目的 探讨艾滋病痴呆综合症(AIDS dementia complex,ADC)患者体内外周和中枢不同组织部位的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)反式激活因子(tat)第一外显子基因序列的变异并对其进行表达,用于研究HIV-1 Tat变异对其神经毒性的影响.方法 从ADC病例尸检标本的脾脏(spleen,SPL)、脑膜(meninges,MG)和基底&(basal ganglia,BG)3个部位的组织中提取基因组DNA,用PCR方法扩增出tat第一外显子基因,并将其插入到pGEMT克隆载体中,测序证实为HIV-1 tat基因,BioEdit软件对测序结果进行比对.将克隆载体双酶切,回收目的基因,并将其连接到pGEX-KG表达栽体中,将重组表达质粒pGEX-KG-tat转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行检验和鉴定.结果 成功克隆了HIV-1tat第一外显子基因,序列比对发现外周和中枢部位的Tat氨基酸序列不同;构建了pCEX-KG-tat重组表达载体,并在原核细胞中高效表达了谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合Tat蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析表明,所表达的蛋白为Tat蛋白.结论 ADC患者外周和中枢不同组织部位的HIV-1 tat第一外显子基因所编码的Tat蛋白氨基酸序列存在变异,在原核细胞中对其进行了高效表达,为Tat蛋白的神经毒性研究奠定了基础.
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