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摘 要：目的 建立高效液相色谱法测定布洛芬注射液的有关物质的方法。方法 采用WondaSil-C18（5？m，4.6*150mm）色谱柱，以0.01mol/L的磷酸溶液（0.7ml磷酸加水至1000ml）-乙腈（60：40）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为214nm，柱温为30℃。结果 在该色谱条件下的系统适用性试验中，布洛芬与2-（4-丁基苯基）丙酸分离良好，精氨酸对有关物质检测无干扰。结论 该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。
关键词：布洛芬注射液 有关物质 高效液相色谱法
布洛芬注射液（商品名：Caldolor）于2009年6月在美国上市，主要用于轻、中度疼痛的治疗以及中、重度疼痛阿片类的辅助用药[1]。为有效控制產品质量，本文采用高效液相色谱法[2]，对布洛芬注射液有关物质进行控制，结果该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。
一、仪器与试药
1.仪器
岛津SPD-M20A高效液相色谱仪
2.样品
布洛芬对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100179-200804，含量：99.5%）；布洛芬注射液（山东方明药业集团股份有限公司，批号：1208051，规格：布洛芬4ml：400mg）；2-（4-丁基苯基）丙酸对照品（Code：B1220000）；4-异丁基苯乙酮对照品，批号10417。乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯，水为纯化水。
二、方法与结果
1.色谱条件
色谱柱为WondaSil-C18（5μm，4.6*150mm），流动相为0.01mol/L的磷酸溶液（0.7ml磷酸加水至1000ml）-乙腈（60：40），流速为1.0ml/min，检测波长为214nm，柱温为30℃；进样量：20μl。
2.溶液的配制
2.1供试品溶液：精密量取本品1.2ml（约相当于含布洛芬120mg）置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
2.2对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
2.3 4-异丁基苯乙酮对照品溶液：精密称取布洛芬4-异丁基苯乙酮对照品适量加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含4-异丁基苯乙酮1.2μg的溶液，作为杂质对照品溶液。
2.4系统适用性试验溶液：精密称取布洛芬对照品、2-（4-丁基苯基）丙酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含布洛芬1.2mg、杂质B3.6μg的溶液，作为系统适用性试验溶液。
3.方法学考察
3.1测定波长的选择
参照欧洲药典布洛芬有关物质方法，制定检测波长为214nm。
3.2系统适用性试验
取系统适用性试验溶液按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，2-（4-丁基苯基）丙酸峰与布洛芬峰分离度良好。
3.3专属性考察
破坏性试验：取样品适量，经酸、碱、氧化、高温、光照破坏后，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，本品在光照、碱性、酸性、氧化、高温强制降解条件下主要降解产物为相对保留时间为1.4倍的峰，对该杂质归属为4-异丁基苯乙酮；降解过程如下：
→
试验结果表明，主峰与相邻杂质的分离度良好，本色谱条件对降解产物专属性良好。
3.4线性范围
取布洛芬对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成一定浓度的溶液，取不同体积，用流动相稀释成不同浓度，分别量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，以浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=46298.15C+3512.92，r=0.999993（n=6），结果表明布洛芬在0.1274～25.4720μg /ml浓度范围内线性关系良好。
3.5精密度试验
照“2.2”项下方法配制对照溶液，取20μl，连续进样6次，RSD为0.29%。另照“2.3”项下方法配制4-异丁基苯乙酮对照品溶液，取20μl，连续进样6次，结果4-异丁基苯乙酮的RSD为0.42%，表明本方法精密度良好。
3.6稳定性试验
照“2.1”项下方法制备供试品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果，供试品溶液在室温条件下放置8小时内，杂质检查结果的RSD均小于20.0%，表明供试品溶液在室温条件下放置8小时内稳定性良好。
照“2.3”项下方法配制4-异丁基苯乙酮对照品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果4-异丁基苯乙酮的RSD为1.14%，表明本方法4-异丁基苯乙酮稳定性良好。
3.7定量限
取布洛芬对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，20μl进样，使其主峰高约为噪音峰高的10倍，此时布洛芬进样浓度为0.126μg/ml，故布洛芬定量限为2.52ng。
取4-异丁基苯乙酮对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，20μl进样，使其主峰高约为噪音峰高的10倍，此时4-异丁基苯乙酮进样浓度为0.088μg/ml，故4-异丁基苯乙酮定量限为1.76ng。定量限结果显示，有关物质测定方法供试品浓度是合适的，4-异丁基苯乙酮可以准确检出。
3.8检测限
精密量取布洛芬、4-异丁基苯乙酮定量限项下的溶液3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为检测限溶液。取20？l，注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比约为3：1，所以本色谱条件下布洛芬的检测限为0.756ng，4-异丁基苯乙酮的检测限为0.528ng。
3.9回收率试验
在空白辅料中分别加入适量的4-异丁基苯乙酮，按照“2.1”项下方法制备供试品溶液，在相当于杂质限度50%、100%、150%的浓度水平下，分别考察4-异丁基苯乙酮的回收率。每个浓度配制3份。结果杂质E平均回收率为101.31%，RSD为1.30%（n=9）。
3.10样品测定
按“2”项下方法配制供试品溶液、对照溶液及杂质对照品溶液，精密量取20μl，照“1”项下色谱条件测定，记录色谱图，4-异丁基苯乙酮按外标法计算，其他杂质按主成分自身对照法计算的有关物质。
三、 讨论
本实验对HPLC法测定布洛芬注射液有关物质的方法学进行了研究，结果表明布洛芬在0.1274～25.4720μg /ml浓度范围内线性关系良好（r=0.999993、n=6）。4-异丁基苯乙酮在0.0862～2.4622μg /ml内线性关系良好（r=0.999995），回收率为101.31%，RSD为1.30%（n=9），精密度、稳定性都较好，故该法用于测定布洛芬注射液的有关物质，专属性强、简便，重复性好，结果准确可靠。
参考文献
[1] Pavliv Leo.Pharmsceutical composition of 2-（4-isobutyl-phenyl） propionic acid[P]. United States Patent：6727286，2004-4-27.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）
[3]EP7.0[S] European Directorate for Quality Medicines， IBUPROFEN：2225-2227.
[4] 赵海桥，苏贵勇，付建，刘存领.HPLC法测定甲磺酸伊马替尼片的有关物质[J].中国化工贸易，2013，5（7）：279-280.
关键词：布洛芬注射液 有关物质 高效液相色谱法
布洛芬注射液（商品名：Caldolor）于2009年6月在美国上市，主要用于轻、中度疼痛的治疗以及中、重度疼痛阿片类的辅助用药[1]。为有效控制產品质量，本文采用高效液相色谱法[2]，对布洛芬注射液有关物质进行控制，结果该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。
一、仪器与试药
1.仪器
岛津SPD-M20A高效液相色谱仪
2.样品
布洛芬对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100179-200804，含量：99.5%）；布洛芬注射液（山东方明药业集团股份有限公司，批号：1208051，规格：布洛芬4ml：400mg）；2-（4-丁基苯基）丙酸对照品（Code：B1220000）；4-异丁基苯乙酮对照品，批号10417。乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯，水为纯化水。
二、方法与结果
1.色谱条件
色谱柱为WondaSil-C18（5μm，4.6*150mm），流动相为0.01mol/L的磷酸溶液（0.7ml磷酸加水至1000ml）-乙腈（60：40），流速为1.0ml/min，检测波长为214nm，柱温为30℃；进样量：20μl。
2.溶液的配制
2.1供试品溶液：精密量取本品1.2ml（约相当于含布洛芬120mg）置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
2.2对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
2.3 4-异丁基苯乙酮对照品溶液：精密称取布洛芬4-异丁基苯乙酮对照品适量加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含4-异丁基苯乙酮1.2μg的溶液，作为杂质对照品溶液。
2.4系统适用性试验溶液：精密称取布洛芬对照品、2-（4-丁基苯基）丙酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含布洛芬1.2mg、杂质B3.6μg的溶液，作为系统适用性试验溶液。
3.方法学考察
3.1测定波长的选择
参照欧洲药典布洛芬有关物质方法，制定检测波长为214nm。
3.2系统适用性试验
取系统适用性试验溶液按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，2-（4-丁基苯基）丙酸峰与布洛芬峰分离度良好。
3.3专属性考察
破坏性试验：取样品适量，经酸、碱、氧化、高温、光照破坏后，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，本品在光照、碱性、酸性、氧化、高温强制降解条件下主要降解产物为相对保留时间为1.4倍的峰，对该杂质归属为4-异丁基苯乙酮；降解过程如下：
→
试验结果表明，主峰与相邻杂质的分离度良好，本色谱条件对降解产物专属性良好。
3.4线性范围
取布洛芬对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成一定浓度的溶液，取不同体积，用流动相稀释成不同浓度，分别量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，以浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=46298.15C+3512.92，r=0.999993（n=6），结果表明布洛芬在0.1274～25.4720μg /ml浓度范围内线性关系良好。
3.5精密度试验
照“2.2”项下方法配制对照溶液，取20μl，连续进样6次，RSD为0.29%。另照“2.3”项下方法配制4-异丁基苯乙酮对照品溶液，取20μl，连续进样6次，结果4-异丁基苯乙酮的RSD为0.42%，表明本方法精密度良好。
3.6稳定性试验
照“2.1”项下方法制备供试品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果，供试品溶液在室温条件下放置8小时内，杂质检查结果的RSD均小于20.0%，表明供试品溶液在室温条件下放置8小时内稳定性良好。
照“2.3”项下方法配制4-异丁基苯乙酮对照品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果4-异丁基苯乙酮的RSD为1.14%，表明本方法4-异丁基苯乙酮稳定性良好。
3.7定量限
取布洛芬对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，20μl进样，使其主峰高约为噪音峰高的10倍，此时布洛芬进样浓度为0.126μg/ml，故布洛芬定量限为2.52ng。
取4-异丁基苯乙酮对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，20μl进样，使其主峰高约为噪音峰高的10倍，此时4-异丁基苯乙酮进样浓度为0.088μg/ml，故4-异丁基苯乙酮定量限为1.76ng。定量限结果显示，有关物质测定方法供试品浓度是合适的，4-异丁基苯乙酮可以准确检出。
3.8检测限
精密量取布洛芬、4-异丁基苯乙酮定量限项下的溶液3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为检测限溶液。取20？l，注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比约为3：1，所以本色谱条件下布洛芬的检测限为0.756ng，4-异丁基苯乙酮的检测限为0.528ng。
3.9回收率试验
在空白辅料中分别加入适量的4-异丁基苯乙酮，按照“2.1”项下方法制备供试品溶液，在相当于杂质限度50%、100%、150%的浓度水平下，分别考察4-异丁基苯乙酮的回收率。每个浓度配制3份。结果杂质E平均回收率为101.31%，RSD为1.30%（n=9）。
3.10样品测定
按“2”项下方法配制供试品溶液、对照溶液及杂质对照品溶液，精密量取20μl，照“1”项下色谱条件测定，记录色谱图，4-异丁基苯乙酮按外标法计算，其他杂质按主成分自身对照法计算的有关物质。
三、 讨论
本实验对HPLC法测定布洛芬注射液有关物质的方法学进行了研究，结果表明布洛芬在0.1274～25.4720μg /ml浓度范围内线性关系良好（r=0.999993、n=6）。4-异丁基苯乙酮在0.0862～2.4622μg /ml内线性关系良好（r=0.999995），回收率为101.31%，RSD为1.30%（n=9），精密度、稳定性都较好，故该法用于测定布洛芬注射液的有关物质，专属性强、简便，重复性好，结果准确可靠。
参考文献
[1] Pavliv Leo.Pharmsceutical composition of 2-（4-isobutyl-phenyl） propionic acid[P]. United States Patent：6727286，2004-4-27.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）
[3]EP7.0[S] European Directorate for Quality Medicines， IBUPROFEN：2225-2227.
[4] 赵海桥，苏贵勇，付建，刘存领.HPLC法测定甲磺酸伊马替尼片的有关物质[J].中国化工贸易，2013，5（7）：279-280.