【摘 要】
：
本试验利用CRISPR/Cas9技术构建弓形虫顶端复合体微线体蛋白11(MIC11)基因敲除虫株,通过乙胺嘧啶药物筛选、绿色荧光蛋白(GFP)观察及PCR技术进行体外和小鼠体内MIC11基因鉴定,确定单克隆敲除株KO-MIC 11.结果 表明,经乙胺嘧啶药物筛选和GFP确认,KO-MIC11株可在Vero细胞和小鼠体内稳定增殖,经PCR鉴定Vero细胞和接种后小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑及生殖器官中均能扩增出KO-MIC 11株B1基因和GFP基因片段,但扩增不出MIC 11基因片段.说明本试验成功构建并
【机 构】
：
东北寒区肉牛科技创新教育部工程研究中心/延边大学,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002
论文部分内容阅读
本试验利用CRISPR/Cas9技术构建弓形虫顶端复合体微线体蛋白11(MIC11)基因敲除虫株,通过乙胺嘧啶药物筛选、绿色荧光蛋白(GFP)观察及PCR技术进行体外和小鼠体内MIC11基因鉴定,确定单克隆敲除株KO-MIC 11.结果 表明,经乙胺嘧啶药物筛选和GFP确认,KO-MIC11株可在Vero细胞和小鼠体内稳定增殖,经PCR鉴定Vero细胞和接种后小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑及生殖器官中均能扩增出KO-MIC 11株B1基因和GFP基因片段,但扩增不出MIC 11基因片段.说明本试验成功构建并筛选出MIC11基因敲除的单克隆虫株,为弓形虫MIC11基因敲除株的致病性研究奠定了基础.
其他文献
Background:Endolysins, the bacteriophage-originated peptidoglycan hydrolases, are a promising replacement for antibiotics due to immediate lytic activity and no antibiotic resistance. The objectives of this study were to investigate the lytic activity of
旨在探究新型的再生医学材料骨颗粒及骨修复材料在临床治疗上的应用.选取了3例犬骨不愈合病例进行移植修复手术治疗,并利用X光检查从骨折线变化、骨痂桥接情况以及骨折临床愈合时间等方面来评价骨折愈合程度.术后各时间点检查结果显示,骨痂桥接顺利,骨折线最早从术后第4周开始模糊,并逐渐消失,骨折临床愈合时间为术后12周.结果 表明,新型再生材料骨颗粒及骨修复材料可支撑骨折并填充缺损,骨修复引导补片能阻止肉芽软组织对骨折断端的填充,从而促进骨折愈合.
旨在制备猪博卡病毒(porcine bocavirus,PBoV) VP1蛋白的多克隆抗体.利用PCR技术对PBoV VP1蛋白的基因进行扩增,将所获基因克隆入原核表达载体,将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中诱导表达.纯化后的目的 蛋白与ISA206佐剂混合后通过背部皮下免疫日本大耳白兔,3次加强免疫后,收集兔血清,利用间接ELISA、Western blot与间接免疫荧光(IFA)的方法验证并评价多克隆抗体的效价与反应性.结果 显示,成功获得PBoV VP1蛋白目的 基因,利用原核表达系统大量表达了VP
为研究佛耳草总黄酮的提取工艺,以浸膏收率和总黄酮的含量为指标,采用正交试验法,考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素对提取效果的影响.结果:建立了佛耳草药材及其提取物中总黄酮的紫外-可见分光光度法,优化佛耳草最佳提取工艺为采用20倍量60％的乙醇提取2次,每次2h.试验表明,本研究建立的分析方法精密度、准确度较高,重现性较好.优化的提取工艺经济、方便、可行.
为制备抗猪树突状细胞表面分子CD103蛋白的多克隆抗体,首先从NCBI基因库中获取查找猪源CD103的基因序列,并设计引物;其次,采集猪呼吸道淋巴结样品,提取RNA反转录为cDNA,通过PCR的方法扩增得到CD103基因片段;然后将所获扩增的CD103基因克隆入原核表达载体pET-30a(+)并构建表达重组质粒pET-30a-CD103,将构建的重组质粒转化入BL21 (DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导蛋白表达,用NI-NTA亲和层析的方法纯化目的 蛋白;最后,将纯化的目的 蛋白与ISA206佐剂混合
Background:Salmonella pullorum is one of the most harmful pathogens to avian species. Magnolol and honokiol, natural compounds extracted from Magnolia officinalis, exerts anti-inflammatory, anti-oxidant and antibacterial activities. This study was conduct
采用亚慢性毒性试验评估壬基酚(nonylphenol,NP)暴露对小鼠肝肾组织的多毒性效应.选用清洁级ICR小鼠随机分为对照组、低剂量组(LNP,100 mg/kg)、中剂量组(MNP,150 mg/kg)和高剂量组(HNP,200 mg/kg),对小鼠进行NP灌胃染毒,连续30 d,记录小鼠采食量、精神状态及体重变化,采集小鼠血样、肝脏、肾脏,并对肝肾组织称重.结果 显示,随着NP染毒剂量增加,小鼠增重量逐渐降低,增重量与NP染毒剂量呈负相关,小鼠肝肾功能、肝脏和肾脏组织结构均受到不同程度的影响.表明N
为了解江苏部分地区禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行状况,从临床分离鉴定出120株APEC,并对分离株的血清型、种系发生型、毒力基因型和耐药性进行检测.血清型检测结果显示,在已定型的95株分离株中,最常见的血清型为O78,约占定型菌株比例为27.4％,其他主要血清型还有O18、O24和O88等.APEC分离株种系发生型以B2型和D型为主,分别占受试分离株的35.6％和28.5％,而A型和B1型分别占22.8％和13.1％.对已知的12种毒力基因的检测发现,铁摄取基因的检出率相对较高,如tonB (93
建立胎牛子宫类器官及内膜上皮细胞分离培养方法,为研究病毒、细菌、营养元素以及毒物等与子宫相互作用机理提供研究平台和模型.试验采用4～6月龄胎牛子宫为研究对象,对子宫组织进行类器官培养,比较不同胎龄胎牛子宫类器官培养成功率,然后从类器官出芽组织分离获得原代子宫内膜上皮细胞,并与组织块分离法培养的细胞形态学、纯化培养、生长速度等方面进行比较,采用免疫细胞化学法对获得的子宫内膜上皮细胞进行角蛋白表达的鉴定.结果 表明用子宫内膜组织进行类器官培养,4月龄胎牛子宫类器官的出芽率显著高于5、6月龄(P＜0.05).通
RNase L是一种独特的核糖核酸内切酶,在机体的抗病毒过程中发挥重要作用.猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白4(nsp4)具有3C样丝氨酸蛋白酶活性,是参与病毒多聚蛋白前体切割的主要蛋白酶,是影响病毒粒子成熟的重要蛋白.课题组前期研究发现猪RNase L(sRNaseL)能够与nsp4互作发挥抗PRRSV作用.为了筛选sRNase L与nsp4互作的区段或位点,本研究分别构建了sRNase L与nsp4的截短体或突变体,通过免疫共沉淀试验进行筛选,结果显示突变体sRNaseL R460A、s