论文部分内容阅读
目的在原核表达系统高效表达人乳头瘤病毒(HPV)16型L2N120E7E6融合蛋白,获得具有高表达水平和强免疫原性的HPV治疗性融合蛋白疫苗。方法利用重叠PCR方法构建经密码子优化的HPVl6L2N120E7E6融合基因,然后将其插入pETga原核表达载体中,采用Westernblot法对表达蛋白进行鉴定。对HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫的小鼠进行特异性抗体和细胞免疫反应的检测,评价其对肿瘤生长的抑制作用。结果密码子优化的HPVl612N120E7E6基因能在原核表达载体pET9a中高效表达,表达水平约占全菌蛋白的48.6%。HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫的小鼠可检测到针对L2、E7和E6的高滴度抗体,抗体滴度分别为1:40317、1:16000和1:800。CPGl826佐剂和HPVl6L2N120E7E6融合蛋白免疫小鼠后,可产生较强的针对HPVl6E749-57肽特异性T细胞免疫反应和较弱的E6特异性T细胞免疫反应,其分泌γ-干扰素的效应T细胞斑点数分别为(464.00±35.52)个和(47.00±11.67)个。HPVl6L2N120E7E6融合蛋白对小鼠移植瘤生长有明显的抑制作用,有80.0%(8/10)的小鼠不成瘤。结论HPVl6L2N120E7E6融合蛋白可作为治疗HPVl6慢性感染和宫颈癌手术后辅助治疗的候选疫苗。