【摘 要】
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目的 构建多房棘球绦虫肌切蛋白(Em severin)基因过表达慢病毒载体,并分析其对人正常肝细胞L02侵袭、迁移能力的影响. 方法 扩增Em severin基因片段,并将其插入慢病毒载体pCD
【机 构】
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遂宁市中心医院检验科,四川遂宁629000;重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室;遂宁市中心医院检验科,四川遂宁,629000
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目的 构建多房棘球绦虫肌切蛋白(Em severin)基因过表达慢病毒载体,并分析其对人正常肝细胞L02侵袭、迁移能力的影响. 方法 扩增Em severin基因片段,并将其插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,构建重组慢病毒pCDH-Em severin.用pCDH-Em severin感染293T细胞,进行病毒包装并检测病毒滴度.以MOI=50的慢病毒感染人正常肝细胞L02,采用RT-qPCR和Western blot检测Em severin mRNA和蛋白表达水平,并通过Transwell和划痕试验检测过表达Em severin对L02细胞侵袭、迁移能力的影响. 结果 成功构建重组慢病毒pCDH-Em severin,感染293T细胞并进行包装后,获得滴度为1×108 TU/ml的pCDH Em severin慢病毒.RT-qPCR和Western blot检测pCDH-Em severin感染组Emseverin mRNA和蛋白表达水平显著高于空白组和空载病毒组(F值分别为98.731和86.074,P＜0.05).Transwell和划痕试验结果表明,过表达Em severin可增强人正常肝细胞L02的侵袭、迁移能力(F值分别为15.439和53.082,P＜0.05). 结论 成功构建重组慢病毒pCDH Emseverin,过表达Em severin可增强人正常肝细胞L02的侵袭、迁移能力,可为研究Emseverin在泡球蚴的侵袭、转移中的作用及机制奠定了基础.
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