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以9个万寿菊雄性不育系总DNA为材料,利用单因素试验和正交试验设计对Mg2+、dNTPs、引物和Taq酶的浓度进行筛选,然后在此基础上筛选模板DNA浓度及ISSR引物并对引物退火温度进行梯度检测,优化得到最佳的ISSR-PCR反应体系,各个因素的最佳水平为:在25μL反应体系中,Mg2+浓度为1.5mmol/L、dNTPs浓度为0.20mmol/L、引物浓度为0.5μmol/L、模板DNA为60ng、TaqDNA聚合酶含量为1U。