【摘 要】
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克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原建立ELISA法用于自身抗体的临床检测。根据GenBank中检索到的人SSA-60kD cDNA序列,在5’和3’非编码区
【机 构】
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中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科; 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所; 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 北京100730;
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)重大专项基金资助项目(No:2002AA2Z2011)
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克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原建立ELISA法用于自身抗体的临床检测。根据GenBank中检索到的人SSA-60kD cDNA序列,在5’和3’非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,经RT-PCR扩增SSA-60kD抗原cDNA。PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导入大肠杆菌DH5α,构建重组质粒PET-30a-SSA-60kD。对后者进行酶切鉴定、测序和分析。在大肠杆菌中表达,产生重组融合蛋白。RT-PCR扩增产物为1632bp。PET-30a-SSA-60kD经EcoR I和V双酶切证实含目的基因片段。序列分析提示与GenBank中一致。利用金属螯合亲和层析法和纯化,得到了高纯度的SSA-60kD重组蛋白。成功克隆人SSA-60kD基因,并构建PET-30a-SSA-60kD,建立了ELISA方法,检测了风湿病患者血清中抗SSA-60kD自身抗体。
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