含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定

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目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双酶切鉴定,成功构建重组逆转录病毒载体;重组逆转录病毒转入包装细胞PT67,经G418筛选,形成了抗性克隆,并测得病毒滴度为3×1011cfu/L,提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论:含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。 Objective: To construct and identify recombinant retrovirus containing rat bcl-2 gene. Methods: The anti-apoptotic gene fragment bcl-2 was excised from pcDNA3.1 vector and inserted into retrovirus vector PLNCX2. The recombinant plasmid was transfected into packaging cell lines PT67 and G418 To establish a cell line stably expressing bcl-2. Results: Recombinant retroviral vector was successfully constructed by double enzyme digestion. Recombinant retrovirus was transfected into packaging cell PT67 and screened by G418 to form a resistant clone with a titer of 3 × 1011cfu / L. Of recombinant murine bcl-2-containing retroviral vector and stable packaging cell line. Conclusion: The anti-apoptotic gene bcl-2 recombinant retroviral vector was successfully constructed.
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