目的 探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1 (Blimp1)-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞(DC)诱导分化的影响.方法 构建Blimp1-短发夹RNA.在Balb/c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中,于培养第2天用慢病毒载体将Blimp1-短发夹RNA转染入细胞中.实验分为3组:空白对照组培养体系中不加入任何慢病毒载体,空载体对照组培养体系中进行空载体慢病毒干预,实验组培养体系中进行lenti-Blimp1-短发夹RNA干预.转染1周内观察转染效率,观察细胞的形态变化,记录细胞的生长曲线;于培养第4、5天收集细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组Blimp1信使RNA和Blimp1的表达情况;检测培养第8天CD11c+、CD86+及主要组织相容性复合物Ⅱ(MHC-Ⅱ)+细胞的百分率.结果 病毒转染后第3天细胞出现荧光,其后荧光持续存在;培养过程中出现典型DC形态,接受病毒转染的细胞有形态受损表现.空白对照组细胞在培养的前3d内呈对数增长,第4天细胞数目达到峰值,为(2.45±0.26)×106/孔,第8天为(2.27±0.19)×106/孔;空载体对照组和实验组细胞在病毒侵染后细胞增殖停滞,细胞数目稳定在(1.69±0.39)×106/孔.空载体对照组和实验组细胞中Blimp1信使RNA及Blimp1蛋白的表达量分别为空白对照组的76%和1%以及105%和74%.在空白对照组、空载体对照组和实验组中CD11c+细胞分别占(69.2±5.0)%、(68.6±5.9)%和(72.8±5.5)%(P>0.05);CD86+细胞分别占(51.1±4.9)%、(49.5±4.3)%和(50.2±6.0)%(P>0.05);MHC-Ⅱ+细胞分别占(56.3±7.3)%、(69.4±4.5)%和(46.5±5.7)%,3组间的差异有统计学意义(P<0.05).结论 慢病毒介导的短发夹RNA基因治疗是调控骨髓源性DC前体细胞Blimp1基因的有效手段;Blimp1基因的下调不影响DC前体细胞的定向分化,但能够抑制DC的成熟。
Blimp1-短发夹RNA基因转染对骨髓源性树突状细胞前体细胞分化的影响
【摘 要】
:
目的 探讨以慢病毒为载体转染B淋巴细胞诱导蛋白-1 (Blimp1)-短发夹RNA对小鼠骨髓原代细胞向树突状细胞(DC)诱导分化的影响.方法 构建Blimp1-短发夹RNA.在Balb/c小鼠骨髓原代细胞定向分化为DC的8d培养体系中,于培养第2天用慢病毒载体将Blimp1-短发夹RNA转染入细胞中.实验分为3组:空白对照组培养体系中不加入任何慢病毒载体,空载体对照组培养体系中进行空载体慢病毒干预
【机 构】
:
430030武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部器官移植重点实验室器官移植教育部重点实验室,430030武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所卫生部器官移植重点
【出 处】
:
中华器官移植杂志
【发表日期】
:
2013年34期
论文部分内容阅读
其他文献
目的 观察单纯疱疹病毒2 gD(HSV-2 gD)基因的树突细胞(DC)疫苗在动物实验中诱发特异性免疫应答情况.方法 用腺病毒介导的、HSV-2 gD基因修饰的DC(pAdeno-HSV-2 gD-DC)疫苗免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第10天检测小鼠血清中gD IgG水平;同时,分离小鼠脾淋巴细胞,用HSV-2gD蛋白刺激,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况、乳酸脱氢酶释放法测定细胞毒性
目的 观察分析妇科再造胶囊对原发性痛经的临床疗效.方法 将原发性痛经患者191例完全随机分为治疗组117例与对照组74例,其中治疗组于月经前5 d开始服妇科再造胶囊,6 粒/次,2
一是在教学中采取“以学定讲”的教学模式,使课堂成为高效的课堂.二是以学定讲的教学模式能够开启、挖掘、提升学生的潜能,能在教师的教学中做到真正的角色转换,而真正的有益
目的 探讨冬凌草甲素对皮片移植排斥反应的影响及其可能机制.方法 BALB/c小鼠移植C57BL/6小鼠皮肤,移植当天开始腹腔注射冬凌草甲素(冬凌草甲素组)、环孢素A(CsA组)和磷酸盐缓冲液(对照组),观察移植皮片存活时间及炎症细胞浸润情况;移植后第7天检测脾细胞中调节性T淋巴细胞(Treg细胞)表达;采用混合淋巴细胞反应分析冬凌草甲素对同种异体反应性T淋巴细胞增殖的影响.以刀豆蛋白刺激正常BAL
自闭症儿童又称孤独症儿童,是儿童广泛性发育障碍中的一种,它波及到儿童的多系统、多领域、多功能的发展障碍.大多表现在情绪行为方面、认知技能和言语沟通方面的障碍.
目的 利用基因工程技术表达单纯疱疹病毒(HSV)包膜糖蛋白(gC)并进行验证.方法 分两段合成gC蛋白,分别合成基因GC-F和GC-R,并分别将基因亚克隆进pSumo-Mut(含Stu Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点)和pCzn1(含Nde Ⅰ和XhoI酶切位点)表达载体,获得pSumo-Mut-GC-F和pCzn 1-GC-R质粒.将两重组质粒转化ArcticExpressTM(DE3)原核宿主菌,异丙
姚先生,33岁,1989年毕业于重点大学化工系,现为工程师,一直从事化学镀镍高新技术的研制、开发、生产;能利用国内外化工原料,根据各厂的实际情况和市场客户需求,独立设计工艺流程和配
期刊
CeO2 as the Oxygen Carrier for Partial Oxidation of Methane to Synthesis Gas in Molten Salts: Thermo
A new technique - the direct partial oxidation of methane to synthesis gas using lattice oxygen in molten salts medium has been introduced. Using CeO2 as the ox
内节育器是高效、长效、简便、安全的节育器具,我国育龄期妇女60%以上采用此法[1].不锈钢圆环是我国应用最广泛、使用时间最久的第一代惰性宫内节育器.绝经后妇女由于体内雌激素水平下降,生殖器官萎缩,常出现节育环错位、嵌顿,造成取环困难甚至失败,因而绝经后取环是困难较大的计划生育手术.为降低手术的难度及患者的痛苦,笔者对50例绝经后取环的妇女术前均顿服尼尔雌醇片,其中25例妇女术前阴道放置米索前列醇,
该文从挂篮荷载计算、施工流程、支座及临时固结施工、挂篮安装及试验、合拢段施工、模板制作安装、钢筋安装、混凝土的浇筑及养生、测量监控等方面人手,介绍了S226海滨大桥