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摘 要：本实验对清热解毒颗粒的质量标准进行研究。含量测定方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（5：25：70）为流动相，检测波长为277nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，连翘苷在0.05～12.8mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。鉴别方法：硅胶G薄层板，甲苯-丙酮（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，8%香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液（7→10）的混合液（0.5：5），在100℃加热至斑点颜色清晰。结论：本法简便、准确，可作为清热解毒颗粒的质量标准。
关键词：清热解毒颗粒；质量标准；研究
清热解毒颗粒由金银花、连翘、水牛角、黄连、地黄、知母、玄参等组成。清热解毒颗粒具有清热解毒，养阴生津，泻火的功效。清热解毒颗粒常用于风热型感冒、流行性腮腺炎及轻、中型乙型脑炎。连翘具有清热，解毒，散结，消肿等功效。连翘主要用于温热、丹毒、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬等。连翘具改善学习记忆障碍、舒张血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解热、防护耳毒性等广泛的药理作用[1-5]。《神农本草经》记载：“主寒热，鼠痿，瘰疬，痈肿恶疮，瘿瘤，结热。”知母，性苦寒，具有有滋阴降火、润燥滑肠、利大小便之效。《药性论》记载：“主治心烦躁闷，骨热劳往来，生产后蓐劳，肾气劳，憎寒虚损，患人虚而口干，加而用之。”本实验对清热解毒颗粒的质量标准进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器：半自动点样仪LINOMAT Ⅳ（瑞士CAMAG）；756PC紫外可见分光光度计（四川汇巨仪器设备有限公司）；EX1600高效液相色谱仪（上海棱谱仪器仪表有限公司）；FR124CN万分之一电子天平（安庆昌嘉电子产品有限公司）；HWY-D28恒温低温水浴（上海羽通仪器仪表厂）；双槽展开缸 PF 562C（瑞士CAMAG）；DHG-9240A电热恒温鼓风干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司）；实验室高纯水机（上海技舟化工科技有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所），菝葜皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所）。
1.4 试剂：甲醇（江苏联海生物科技有限公司）、乙腈（广州市西陇化工有限公司）、香草醛（深圳市永熙化工有限公司）、苯（北京亚太龙兴化工有限公司）、硫酸（上海海曲化工有限公司）、乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）、盐酸（北京亚太龙兴化工有限公司）、甲苯（广州市西陇化工有限公司）、丙酮（北京亚太龙兴化工有限公司）、无水乙醇（广州市西陇化工有限公司）。
1.5 试药：清热解毒颗粒
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：乙腈-甲醇-水（5：25：70）为流动相，检测波长：277nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按连翘苷峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取连翘苷对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取清热解毒颗粒适量，研细，精密称定，加20毫升甲醇超声提取30分钟，过滤，蒸干滤液，残渣加流动溶解转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 专属性试验
取金银花、水牛角、大青叶、黄连、地黄、知母、玄参等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述实验方法检测，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，精密吸取20μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.65%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量连翘苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取20μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，连翘苷在0.05～12.8mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的清热解毒颗粒样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.66%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
取对照品适量分别精密加入清热解毒颗粒中，按含量测定进行测定，计算回收率为99.3%，RSD为0.69%。
3 鉴别
取清热解毒颗粒适量，加乙醇20ml，加热回流40min后取上清液，加盐酸1ml加热回流1h，取提取液10ml，浓缩至约5ml，加水10ml，用苯20ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取知母对照药材2g，加乙醇20ml，加热回流40min后取上清液，加盐酸1ml加热回流1h，取提取液10ml，浓缩至约5ml，加水10ml，用苯20ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml使溶解，作为对照品溶液。取除知母以外药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。吸取上述溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9：1）为展开剂，展开、取出、晾干，喷以8%香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液（7→10）的混合液（0.5：5），在100℃加热至斑点颜色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。
4 结论
本实验分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于清热解毒颗粒中连翘苷的含量测定。样品与知母对照药材对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。该鉴别方法专属性强，操作简单，可用于清熱解毒颗粒中知母的鉴别。
参考文献
[1]王忆杭，肖培根，刘新民.连翘酯苷对拟AD复合动物模型小鼠学习记忆的改善作用及其机制研究[J].中国实验动物学报，2011（05）.
[2]孟祥乐，李俊平，李丹，孙习鹏，李颜，余奇，万丽丽，郭澄.连翘的化学成分及其药理活性研究进展[J].中国药房，2010（43）.
[3]秦宇，张文丽，林媛媛，杨默媛.连翘化学成分与抗氧化活性研究[J].中国实验方剂学杂志，2013（10）.
[4]张杲.连翘（Forsythia suspensa）叶药用价值及其药用活性组分的初步研究[D].陕西师范大学，2006.
[5]欧阳辉，谢丽艳，黄小方，罗莎，杨世林.贯叶连翘的化学成分与药理研究进展及前景展望[J].江西中医药，2010（07）.
关键词：清热解毒颗粒；质量标准；研究
清热解毒颗粒由金银花、连翘、水牛角、黄连、地黄、知母、玄参等组成。清热解毒颗粒具有清热解毒，养阴生津，泻火的功效。清热解毒颗粒常用于风热型感冒、流行性腮腺炎及轻、中型乙型脑炎。连翘具有清热，解毒，散结，消肿等功效。连翘主要用于温热、丹毒、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬等。连翘具改善学习记忆障碍、舒张血管、抗氧化、抗菌、抗感染、解热、防护耳毒性等广泛的药理作用[1-5]。《神农本草经》记载：“主寒热，鼠痿，瘰疬，痈肿恶疮，瘿瘤，结热。”知母，性苦寒，具有有滋阴降火、润燥滑肠、利大小便之效。《药性论》记载：“主治心烦躁闷，骨热劳往来，生产后蓐劳，肾气劳，憎寒虚损，患人虚而口干，加而用之。”本实验对清热解毒颗粒的质量标准进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器：半自动点样仪LINOMAT Ⅳ（瑞士CAMAG）；756PC紫外可见分光光度计（四川汇巨仪器设备有限公司）；EX1600高效液相色谱仪（上海棱谱仪器仪表有限公司）；FR124CN万分之一电子天平（安庆昌嘉电子产品有限公司）；HWY-D28恒温低温水浴（上海羽通仪器仪表厂）；双槽展开缸 PF 562C（瑞士CAMAG）；DHG-9240A电热恒温鼓风干燥箱（上海和呈仪器制造有限公司）；实验室高纯水机（上海技舟化工科技有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所），菝葜皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所）。
1.4 试剂：甲醇（江苏联海生物科技有限公司）、乙腈（广州市西陇化工有限公司）、香草醛（深圳市永熙化工有限公司）、苯（北京亚太龙兴化工有限公司）、硫酸（上海海曲化工有限公司）、乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）、盐酸（北京亚太龙兴化工有限公司）、甲苯（广州市西陇化工有限公司）、丙酮（北京亚太龙兴化工有限公司）、无水乙醇（广州市西陇化工有限公司）。
1.5 试药：清热解毒颗粒
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：乙腈-甲醇-水（5：25：70）为流动相，检测波长：277nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按连翘苷峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取连翘苷对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取清热解毒颗粒适量，研细，精密称定，加20毫升甲醇超声提取30分钟，过滤，蒸干滤液，残渣加流动溶解转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 专属性试验
取金银花、水牛角、大青叶、黄连、地黄、知母、玄参等药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述实验方法检测，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 精密度试验
取对照品溶液按上述色谱条件，精密吸取20μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.65%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量连翘苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取20μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，连翘苷在0.05～12.8mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的清热解毒颗粒样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.66%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
取对照品适量分别精密加入清热解毒颗粒中，按含量测定进行测定，计算回收率为99.3%，RSD为0.69%。
3 鉴别
取清热解毒颗粒适量，加乙醇20ml，加热回流40min后取上清液，加盐酸1ml加热回流1h，取提取液10ml，浓缩至约5ml，加水10ml，用苯20ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取知母对照药材2g，加乙醇20ml，加热回流40min后取上清液，加盐酸1ml加热回流1h，取提取液10ml，浓缩至约5ml，加水10ml，用苯20ml振摇提取，提取液蒸干，残渣加苯2ml使溶解，作为对照品溶液。取除知母以外药材按样品制备工艺制成阴性对照样品，按上述方法制成阴性对照样品。吸取上述溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（9：1）为展开剂，展开、取出、晾干，喷以8%香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液（7→10）的混合液（0.5：5），在100℃加热至斑点颜色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照无干扰。
4 结论
本实验分离效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于清热解毒颗粒中连翘苷的含量测定。样品与知母对照药材对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。该鉴别方法专属性强，操作简单，可用于清熱解毒颗粒中知母的鉴别。
参考文献
[1]王忆杭，肖培根，刘新民.连翘酯苷对拟AD复合动物模型小鼠学习记忆的改善作用及其机制研究[J].中国实验动物学报，2011（05）.
[2]孟祥乐，李俊平，李丹，孙习鹏，李颜，余奇，万丽丽，郭澄.连翘的化学成分及其药理活性研究进展[J].中国药房，2010（43）.
[3]秦宇，张文丽，林媛媛，杨默媛.连翘化学成分与抗氧化活性研究[J].中国实验方剂学杂志，2013（10）.
[4]张杲.连翘（Forsythia suspensa）叶药用价值及其药用活性组分的初步研究[D].陕西师范大学，2006.
[5]欧阳辉，谢丽艳，黄小方，罗莎，杨世林.贯叶连翘的化学成分与药理研究进展及前景展望[J].江西中医药，2010（07）.