【摘 要】
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根据鲽形目和鲈形目鱼类的IGF-Ⅱ基因保守序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆得到编码星突江鲽(Platichthys stellatus) IGF-Ⅱ成熟肽的全长cDNA序列(210 bp),同源性分析
【机 构】
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农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所,上海海洋大学水产与生命学院
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根据鲽形目和鲈形目鱼类的IGF-Ⅱ基因保守序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆得到编码星突江鲽(Platichthys stellatus) IGF-Ⅱ成熟肽的全长cDNA序列(210 bp),同源性分析显示IGF-Ⅱ成熟肽在B、A和D区高度保守.利用原核表达载体pET-28a构建了重组表达质粒(IGF-Ⅱ/pET28a),转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,获得了N端含6个组氨酸的重组蛋白.37℃条件下用1.0 mmol/L的IPTG诱导6h,目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的42.7％.重组蛋白主要以包涵体形式存在,经SDS-PAGE电泳检测,IGF-Ⅱ重组蛋白大小为11.4 kD,Western-Blotting免疫印迹呈阳性.包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后,获得了纯化IGF-Ⅱ蛋白.细胞增殖实验结果显示,重组蛋白可显著促进人胚胎肾细胞HEK293T的增殖,表明获得的IGF-Ⅱ重组蛋白具有细胞水平的生物活性.研究结果为深入研究星突江鲽IGF-Ⅱ的功能提供了基础资料.
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