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摘要：利用二氯甲烷提取各类食品中的N-二甲基亚硝胺，采用GC-MS法（SIM与Scan相结合）进行定性定量检测。结果表明：该试验方法较国标方法（ GB/T 5009.26-2003）前处理简单快速、便于操作，回收率在80.1%～101.5%之间，其RSD可达1.67%～ 6.85%，线性相关系数为0.999917，检测限为0.3μg/kg，满足食品中N-二甲基亚硝胺的残留含量的测定要求。
关键词：N-二甲基亚硝胺 气质联用 选择离子法
中图分类号：TS254.7 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）16-0043-04
Abstract：N-dimethylnitrosamine in various food was extracted by Dichloromethane and make？qualitative and quantitative detection （SIM combined with Scan） with GC-MS method.The results showed that： Sample preparation is better than the？national standard method（GB/T？5009.26-2003） is simple，rapid and easy to operate.The average recoveries were 80.1%～101.5% ，their RSD was above 1.67%～6.85%，the linear correlation coefficients were 0.999917， the detection limit is 0.3μg/kg.
Key Words：N-Dimethylnitrosamine gas chromatography-mass SIM
N-二甲基亚硝胺是一种半挥发性有机化学品，为强致癌物质，可以引起肝脏肿瘤[1]。啤酒、肉制品及鱼类腌制品等食品中均含有N-二甲基亚硝胺，我国制订了部分亚硝胺检测方法和限量标准，即GB/T5009.26-2003[2]《食品中N-亚硝胺类的测定》和GB2762-2012[3]《食品中污染物限量》对水产动物及其制品和肉及肉制品中的N-二甲基亚硝胺做了限量要求，而且限量很低，肉制品3.0μg/kg，水产品4.0μg/kg[4-5]。国标方法2中GC-MS法前处理复杂、耗时长，有机溶剂用量大，同时采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）检测食品中的N-二甲基亚硝胺含量也有许多相关报道[6-8]，大多集中于对水产品的测定。本试验采用改进的气质联用法测定了不同种类食品中N-二甲基亚硝胺含量，实验结果表明，本方法前处理简单，成本低，耗时少，且对各类制品的回收率及检测限都能满足定量要求。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器：QPMS2010 plus气相质谱联用仪，配备AOC-20i自动进样器（日本岛津公司出品），超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司），旋转蒸发器（巩义予华仪器有限责任公司），离心机，自动振荡器（上海浦东物理学仪器厂）。
试剂：二氯甲烷（AR，国外进口）、氯化钠（AR）、无水硫酸钠（AR）；标准品：N-二甲基亚硝胺标准品。
样品：由市场购得。
1.2 检测方法
1.2.1 色谱条件
HP-5MS毛细管色谱柱（60m×0.32mm×0.25μm） （美国Agilent公司出品）；进样口温度200℃；分流进样，分流比5：1；载气为氦气（纯度99.999%），流速1.2mL/min；程序升温：40℃下保持1min，以10℃/min升至200℃，保持1min，全部程序时间18min，自动进样，进样量1μL。
1.2.2 质谱条件
离子源温度：230℃；接口温度：250℃；电离方式：电子轰击离子源；电子能量：70eV；质量数扫描范围：30～100；溶剂延迟：3min；阈值：0；特征碎片峰：42、43、74；定量离子：74。
1.2.3 标准溶液的配制
将N-二甲基亚硝胺（100μg/mL）标准溶液准确配制成质量浓度为10μg/mL的标准储备液，以二氯甲烷逐级稀释配制0.005、0.01、0.05、0.10、0.50、1.0μg/mL系列浓度的N-二甲基亚硝胺标准溶液。
1.2.4 样品的处理
（1）固体样品的处理：将不同种类的肉样连皮切成小块，在组织捣碎机粉碎成匀浆或粉末状均匀样品。准确称取已粉碎并混匀的样品10g，加入适量的氯化钠混匀，加入二氯甲烷20mL超声提取5min，振荡提取20min，收集提取液，重复上述提取过程两次，合并有机溶剂相，经无水硫酸钠过滤脱水后，在40℃水浴下抽真空浓缩至近干（不得干透）。定容至2.0mL混匀，供气相色谱/质谱仪分析。
（2）液体样品的处理：准确称取液体样品20g于离心管中，加入20mL二氯甲烷超声提取20min，离心5min，收集有机相，重复上述提取过程三次，合并有机溶剂相，经无水硫酸钠过滤脱水后，在40℃水浴下抽真空濃缩至近干（不得干透）。定容至2.0mL混匀，供气相色谱/质谱仪分析。
2.2 线性关系
用二氯甲烷将浓度为10μg/mL的标准储备液配制成0.005、0.01、0.05、0.10、0.50、1.0μg/mL系列浓度，按上述条件进样1μL，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标分别进行线性回归。结果如表1所示。
2.3 回收率
2.3.1 不同提取方式及萃取次数对回收率响应的影响
考虑到不同提取方式和萃取次数会影响样品中 N-二甲基亚硝胺的萃取效果，在其他试验条件相同的情况下，对加入固定质量浓度N-二甲基亚硝胺标准溶液的10.0g空白肉样进行萃取试验。在相同的其他试验条件下选择（1）超声提取20min，（2）振荡提取20min，（3）超声5min，振荡15min，3个提取方式研究对待测物萃取效果的影响，结果如图6（a）。同时选取萃取次数为1、2、3共三个水平对萃取效果的影响，结果如图6（b）。 三种萃取方式中，对待测物采用即超声又振荡的提取其响应值最高。样品萃取次数在2、3次时的响应值变化不大。因此在提高检测效率，节约成本的前提下，样品选择超声振荡提取，重复两次。
2.3.2 不同样品在同一添加量水平的回收率
取未检出N-二甲基亚硝胺的不同样品，测定同一添加水平的回收率和精密度，测定结果如表2。不同样品在同一水平的加标回收虽有一定的差别，但满足国家标准规定的要求。
2.3.3 同一样品在不同添加量水平的回收率
取未检出N-二甲基亚硝胺的固体样品10.0g，4份，测定4个添加水平的回收率和精密度，测定结果如表3，6次连续进样的色谱图如图7。
2.4 精密度试验
选择同一样品四个不同水平添加量的精密度测定结果如表3，其RSD的范围为1.67%～6.85%，表明仪器检测过程具有较好的精密度，该检测方法重现性良好，具有良好的适用性。本试验采用的样品处理方法，能够达到国家标准规定的要求，能够满足GB2762-2005规定的要求。
2.5 检出限
配制0.005μg/mL的N-二甲基亚硝胺的标样，采取分流进样，进样量为1μL，测得信噪比为10.0（提取离子74），检测限以3倍噪声计算，得到N-二甲基亚硝胺的仪器检测限为（如表1）：
以10g称样量，最后定容体积为2mL，进样量为1μL，本方法的检测限为μg/kg
本试验采用的检测方法适宜检测食品中的痕量亚硝胺。
3 结语
本试验采用GC-MS法测定不同食品中N-二甲基亚硝胺的含量。比较了不同提取方式、不同萃取次數的影响。相对国家标准方法（GB/T 5009.26-2003[2]），本试验方法前处理简单、快速，便于操作，大大减少了有机溶剂的使用量。通过对线性、精密度、检测限和样品的测定，验证了方法的可行性。其回收率在80.1%～101.5%之间，RSD可达RSD可达1.67%～6.85%，线性相关系数为0.999917，检测限为0.3μg/kg，该法能够满足国家对食品中痕量N-二甲基亚硝胺的检测要求，可以用于各类食品（包括啤酒、熏烤肠、海产品等）中N-二甲基亚硝胺的测定。
参考文献
[1]胡丽芳，尹德凤，周瑶敏，严寒，王冬根.气质联用法测定咸鱼中N-二甲基亚硝胺含量[J].江西农业学报，2009，21（9）：135～136.
[2]GB/T 5009.26-2003，食品中N-亚硝胺类的测定[S].
[3]GB 2762-2012，食品中污染物限量[S].
[4]翁其香.气质联用法测定食品中N-二甲基亚硝胺含量[J].福建分析测试，2006，15（4）：18～19.
[5]丁红梅，陈彬，杨兴龙，张霞.气质联用法测定生食水产品中的挥发性N-亚硝胺[J].食品与机械，2010，26（6）：54～56.
[6]吴燕燕，刘法佳，李来好，杨贤庆，等.GC-MS检测咸鱼中N-亚硝胺的条件优化[J].南方水产科学，2012，8（4）：16～22.
[7]王秀元，赵华，蒋玲波，方益，张薇英，王萍亚.GC-MS法测定腌制水产品中3种N-亚硝胺含量[J].浙江海洋学院学报（自然科学版），2012，31（6），521～526.
[8]赵华，王秀元，王萍亚，周勇，等.气相色谱-质谱联用法测定腌制水产品中的挥发性N-亚硝胺类化合物[J].色谱，2013，31（3）：223～227.
关键词：N-二甲基亚硝胺 气质联用 选择离子法
中图分类号：TS254.7 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）16-0043-04
Abstract：N-dimethylnitrosamine in various food was extracted by Dichloromethane and make？qualitative and quantitative detection （SIM combined with Scan） with GC-MS method.The results showed that： Sample preparation is better than the？national standard method（GB/T？5009.26-2003） is simple，rapid and easy to operate.The average recoveries were 80.1%～101.5% ，their RSD was above 1.67%～6.85%，the linear correlation coefficients were 0.999917， the detection limit is 0.3μg/kg.
Key Words：N-Dimethylnitrosamine gas chromatography-mass SIM
N-二甲基亚硝胺是一种半挥发性有机化学品，为强致癌物质，可以引起肝脏肿瘤[1]。啤酒、肉制品及鱼类腌制品等食品中均含有N-二甲基亚硝胺，我国制订了部分亚硝胺检测方法和限量标准，即GB/T5009.26-2003[2]《食品中N-亚硝胺类的测定》和GB2762-2012[3]《食品中污染物限量》对水产动物及其制品和肉及肉制品中的N-二甲基亚硝胺做了限量要求，而且限量很低，肉制品3.0μg/kg，水产品4.0μg/kg[4-5]。国标方法2中GC-MS法前处理复杂、耗时长，有机溶剂用量大，同时采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）检测食品中的N-二甲基亚硝胺含量也有许多相关报道[6-8]，大多集中于对水产品的测定。本试验采用改进的气质联用法测定了不同种类食品中N-二甲基亚硝胺含量，实验结果表明，本方法前处理简单，成本低，耗时少，且对各类制品的回收率及检测限都能满足定量要求。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器：QPMS2010 plus气相质谱联用仪，配备AOC-20i自动进样器（日本岛津公司出品），超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司），旋转蒸发器（巩义予华仪器有限责任公司），离心机，自动振荡器（上海浦东物理学仪器厂）。
试剂：二氯甲烷（AR，国外进口）、氯化钠（AR）、无水硫酸钠（AR）；标准品：N-二甲基亚硝胺标准品。
样品：由市场购得。
1.2 检测方法
1.2.1 色谱条件
HP-5MS毛细管色谱柱（60m×0.32mm×0.25μm） （美国Agilent公司出品）；进样口温度200℃；分流进样，分流比5：1；载气为氦气（纯度99.999%），流速1.2mL/min；程序升温：40℃下保持1min，以10℃/min升至200℃，保持1min，全部程序时间18min，自动进样，进样量1μL。
1.2.2 质谱条件
离子源温度：230℃；接口温度：250℃；电离方式：电子轰击离子源；电子能量：70eV；质量数扫描范围：30～100；溶剂延迟：3min；阈值：0；特征碎片峰：42、43、74；定量离子：74。
1.2.3 标准溶液的配制
将N-二甲基亚硝胺（100μg/mL）标准溶液准确配制成质量浓度为10μg/mL的标准储备液，以二氯甲烷逐级稀释配制0.005、0.01、0.05、0.10、0.50、1.0μg/mL系列浓度的N-二甲基亚硝胺标准溶液。
1.2.4 样品的处理
（1）固体样品的处理：将不同种类的肉样连皮切成小块，在组织捣碎机粉碎成匀浆或粉末状均匀样品。准确称取已粉碎并混匀的样品10g，加入适量的氯化钠混匀，加入二氯甲烷20mL超声提取5min，振荡提取20min，收集提取液，重复上述提取过程两次，合并有机溶剂相，经无水硫酸钠过滤脱水后，在40℃水浴下抽真空浓缩至近干（不得干透）。定容至2.0mL混匀，供气相色谱/质谱仪分析。
（2）液体样品的处理：准确称取液体样品20g于离心管中，加入20mL二氯甲烷超声提取20min，离心5min，收集有机相，重复上述提取过程三次，合并有机溶剂相，经无水硫酸钠过滤脱水后，在40℃水浴下抽真空濃缩至近干（不得干透）。定容至2.0mL混匀，供气相色谱/质谱仪分析。
2.2 线性关系
用二氯甲烷将浓度为10μg/mL的标准储备液配制成0.005、0.01、0.05、0.10、0.50、1.0μg/mL系列浓度，按上述条件进样1μL，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标分别进行线性回归。结果如表1所示。
2.3 回收率
2.3.1 不同提取方式及萃取次数对回收率响应的影响
考虑到不同提取方式和萃取次数会影响样品中 N-二甲基亚硝胺的萃取效果，在其他试验条件相同的情况下，对加入固定质量浓度N-二甲基亚硝胺标准溶液的10.0g空白肉样进行萃取试验。在相同的其他试验条件下选择（1）超声提取20min，（2）振荡提取20min，（3）超声5min，振荡15min，3个提取方式研究对待测物萃取效果的影响，结果如图6（a）。同时选取萃取次数为1、2、3共三个水平对萃取效果的影响，结果如图6（b）。 三种萃取方式中，对待测物采用即超声又振荡的提取其响应值最高。样品萃取次数在2、3次时的响应值变化不大。因此在提高检测效率，节约成本的前提下，样品选择超声振荡提取，重复两次。
2.3.2 不同样品在同一添加量水平的回收率
取未检出N-二甲基亚硝胺的不同样品，测定同一添加水平的回收率和精密度，测定结果如表2。不同样品在同一水平的加标回收虽有一定的差别，但满足国家标准规定的要求。
2.3.3 同一样品在不同添加量水平的回收率
取未检出N-二甲基亚硝胺的固体样品10.0g，4份，测定4个添加水平的回收率和精密度，测定结果如表3，6次连续进样的色谱图如图7。
2.4 精密度试验
选择同一样品四个不同水平添加量的精密度测定结果如表3，其RSD的范围为1.67%～6.85%，表明仪器检测过程具有较好的精密度，该检测方法重现性良好，具有良好的适用性。本试验采用的样品处理方法，能够达到国家标准规定的要求，能够满足GB2762-2005规定的要求。
2.5 检出限
配制0.005μg/mL的N-二甲基亚硝胺的标样，采取分流进样，进样量为1μL，测得信噪比为10.0（提取离子74），检测限以3倍噪声计算，得到N-二甲基亚硝胺的仪器检测限为（如表1）：
以10g称样量，最后定容体积为2mL，进样量为1μL，本方法的检测限为μg/kg
本试验采用的检测方法适宜检测食品中的痕量亚硝胺。
3 结语
本试验采用GC-MS法测定不同食品中N-二甲基亚硝胺的含量。比较了不同提取方式、不同萃取次數的影响。相对国家标准方法（GB/T 5009.26-2003[2]），本试验方法前处理简单、快速，便于操作，大大减少了有机溶剂的使用量。通过对线性、精密度、检测限和样品的测定，验证了方法的可行性。其回收率在80.1%～101.5%之间，RSD可达RSD可达1.67%～6.85%，线性相关系数为0.999917，检测限为0.3μg/kg，该法能够满足国家对食品中痕量N-二甲基亚硝胺的检测要求，可以用于各类食品（包括啤酒、熏烤肠、海产品等）中N-二甲基亚硝胺的测定。
参考文献
[1]胡丽芳，尹德凤，周瑶敏，严寒，王冬根.气质联用法测定咸鱼中N-二甲基亚硝胺含量[J].江西农业学报，2009，21（9）：135～136.
[2]GB/T 5009.26-2003，食品中N-亚硝胺类的测定[S].
[3]GB 2762-2012，食品中污染物限量[S].
[4]翁其香.气质联用法测定食品中N-二甲基亚硝胺含量[J].福建分析测试，2006，15（4）：18～19.
[5]丁红梅，陈彬，杨兴龙，张霞.气质联用法测定生食水产品中的挥发性N-亚硝胺[J].食品与机械，2010，26（6）：54～56.
[6]吴燕燕，刘法佳，李来好，杨贤庆，等.GC-MS检测咸鱼中N-亚硝胺的条件优化[J].南方水产科学，2012，8（4）：16～22.
[7]王秀元，赵华，蒋玲波，方益，张薇英，王萍亚.GC-MS法测定腌制水产品中3种N-亚硝胺含量[J].浙江海洋学院学报（自然科学版），2012，31（6），521～526.
[8]赵华，王秀元，王萍亚，周勇，等.气相色谱-质谱联用法测定腌制水产品中的挥发性N-亚硝胺类化合物[J].色谱，2013，31（3）：223～227.